氨溴索联合万古霉素对表皮葡萄球菌生物膜破坏作用的体内研究

摘要

目的：建立兔表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis)生物膜(Biofilm, BF)引起的导管相关性血流感染(Catheter-related bloodstream infection, CRBSI)模型,探讨氨溴索联合万古霉素在体内复杂环境下对表皮葡萄球菌生物膜的破坏作用。
　　方法：体外培养表皮葡萄球菌BF，将长有成熟BF的导管插入兔子颈外静脉，建立兔子CRBSI模型，实验分为4组，分别为空白对照组，单独氨溴索组，单独万古霉素组，氨溴索联合万古霉素组，分别接受不同药物封管治疗3天。涂板计数心脏、肝脏、肾脏组织匀浆细菌集落形成单位（Colony forming units, CFU）及导管表面细菌CFU；扫描电子显微镜(Scanning electron microscope, SEM)观察导管内表皮葡萄球菌BF结构的改变情况；苏木精-伊红（H&E）染色观察心脏、肝脏、肾脏组织炎症反应。
　　结果：成功建立了兔表皮葡萄球菌生物膜引起的CRBSI模型。各组导管菌落 log10(CFU/ml)计数结果分别为：空白对照组7.02(6.56-7.80)/ml，单独氨溴索组6.41(6.32-6.83)/ml，单独万古霉素组4.30(0-4.90)/ml，氨溴索+万古霉素组0(0-2.25)/ml；各组心脏组织匀浆log10(CFU/ml)计数结果分别为：空白对照组2.34(2.20-2.45)/ml，单独氨溴索组1.76(1.47-2.00)/ml，单独万古霉素组1.21(1.04-1.63)/ml，氨溴索+万古霉素组0.45(0-1.24)/ml；各组肝脏组织匀浆log10(CFU/ml)计数结果分别为：空白对照组3.00(2.81-3.07)/ml，单独氨溴索组2.49(2.30-2.66)/ml，单独万古霉素组1.02(0-1.12)/ml，氨溴索+万古霉素组0(0-0.22)/ml；各组肾脏组织匀浆log10(CFU/ml)计数结果分别为：空白对照组2.11(2.00-2.24)/ml，单独氨溴索组1.30(1.01-1.60)/ml，单独万古霉素组1.05(0.41-1.14)/ml，氨溴索+万古霉素组0(0-0.35)/ml。与空白对照组比较,单独氨溴索组导管内CFU显著减少，P＜0.05，与单独万古霉素组比较，氨溴索+万古霉素组CFU进一步减少，P＜0.05。SEM结果显示单独氨溴索组细菌BF结构变得更加疏松，而氨溴索+万古霉素组基本未观察到生物膜结构，仅可看到个别的细菌存在。心脏、肝脏、肾脏组织H&E染色结果显示各个器官中均以氨溴索+万古霉素组炎症反应最轻微。
　　结论：在体内复杂环境下，氨溴索仍能对表皮葡萄球菌BF结构产生破坏作用，并能够杀灭BF内的细菌。氨溴索与万古霉素联合使用能够更为显著的清除导管表皮葡萄球菌BF结构，减轻各器官的炎症反应，说明氨溴索在增强万古霉素杀菌作用的同时也具有协同清除作用。