尼古丁对阿尔兹海默症中APP代谢影响及其作用机制研究

摘要

目的：
　　研究报道尼古丁可以作用于特定的乙酰胆碱受体，不仅可以减少Aβ的产生，并且可以增加具有神经保护作用的分泌型的sAPPα，因而为治疗AD提供一个方向，但是目前其作用机制尚不明确。本研究通过体外实验研究尼古丁对APP代谢的影响及其作用机制。
　　方法：
　　APP被β分泌酶BACE1切割产生sAPPβ和C99或C89，C99和C89再被γ分泌酶的主要亚型PS1切割产生Aβ40和Aβ42，还有是APPα分泌酶ADAM10切割产生分泌型的sAPPα和C83，C83再被γ分泌酶的主要亚型PS1切割产生片段P3。
　　1.采用浓度梯度的尼古丁（0M、10-7M、10-6M、10-5M、10-4M、10-3M）处理干预细胞6hr，用Western blotting检测APP及其产物C83蛋白的表达水平。并检测APP主要的切割酶ADAM10、BACE1、PS1的变化。
　　2.分成一个对照组和尼古丁处理组，western blot检测胞内和膜上磷酸化的PKC和RACK1的变化。
　　3.用PKC的抑制剂提前30min干预细胞，再用尼古丁处理6hr，western blot检测蛋白C83和media中sAPPα的变化。
　　4.最后用siRNA knockdown RACK1，然后用PKC的激动剂和尼古丁处理细胞后western blot检测C83的变化。
　　结果：
　　1.用浓度梯度的尼古丁处理细胞后，western blot检测发现APP、BACE1、PS1的表达水平无明显差异，ADAM10和C83蛋白水平在尼古丁处理后明显增加。
　　2.尼古丁处理后，导致膜上RACK1增加并且磷酸化的PKC水平也增加。说明PKC被激活了。
　　3.PKC抑制剂处理后能够逆转尼古丁引起的C83和sAPPα增加现象，说明尼古丁作用于nAChR后经PKC介导的信号通路引起ADAM10表达上调，从而使得APP被更多的向非淀粉样蛋白路径代谢。
　　4.siRNA knockdown RACK1部分实验，目前已筛选出一条有效的siRNA，需要进一步实验研究，用PKC激动剂和尼古丁处理，检测是否RACK1在PKC信号通路的上游。
　　结论：
　　我们发现尼古丁确实能够使得APP更多向非淀粉蛋白路径代谢，并且是经过激活PKC，经PKC介导的信号通路进行的。这为治疗AD提供了一个潜在的思维方向。

目录

声明

英汉缩略语名词对照

第一部分 尼古丁对阿尔兹海默症中APP代谢的影响及其作用机制研究

前言

1材料和方法

1.1材料

1.2实验方法

1.3数据统计

2实验结果

2.1尼古丁处理SH-SY5Y/APPsw细胞6hr，APP明显被更多的向非淀粉样蛋白形成路径切割

2.2尼古丁处理SH-SY5Y/APPsw细胞6h，ELISA检测media中Aβ40没有变化，检测Aβ42浓度太低。

2.3尼古丁处理SH-SY5Y/APPsw细胞6h，主要的α分泌酶ADAM10增加，BACE1和主要的γ分泌酶主要亚型PS1均没有变化。

2.4尼古丁处理SH-SY5Y/APPsw细胞6h，胞浆内P-PKC和RACK1没有变化，而膜上的P-PKC和RACK1增加，说明尼古丁激活了PKC

2.5阻断PKC信号通路能够逆转尼古丁引起的C83和sAPPα增加。

3讨论

参 考 文 献

第二部分 AMPAR內吞作用介导长时程增强衰退及记忆丧失在阿尔兹海默症模型鼠中的作用研究

前言

1材料和方法

1.1材料

1.2实验方法

2实验结果

参 考 文 献

文献综述:尼古丁对阿尔兹海默症作用的研究进展

致谢

攻读硕士期间发表论文