氟西汀对APP/PS1双转基因AD小鼠神经细胞和对体外APP695swe细胞的保护作用及机制的实验研究

摘要

目的：
　　本研究初步探讨氟西汀(Fluoxetine)对 APP/PS1双转基因 AD小鼠神经细胞和对体外APP695swe细胞的保护作用及机制。
　　方法：
　　体内实验以APP/PS1双转基因AD小鼠海马神经细胞为主要研究对象。以APP/PS1双转基因AD小鼠来模拟AD患者并将其随机分为两组，其中对实验组每只小鼠每天进行腹腔注射氟西汀10mg/kg；对照组以等量的生理盐水替代，其他与注射氟西汀组相同。另以与其同窝出生的正常鼠模拟正常人作为正常组。60天后对三组小鼠海马内不同区域的细胞进行TUNEL染色。
　　体外实验神经细胞模型为小鼠神经纤维瘤细胞，野生型 N2A/WT细胞和β-淀粉样蛋白(amyloidβ-protein, Aβ)过表达型N2A/APP695swe细胞的保护作用及可能机制。
　　CCK-8法测定氟西汀对APP695细胞活性的影响，选择最适氟西汀浓度作为后续实验的药物浓度。后分为 WT组、APP695+氟西汀组、APP695组，三组细胞分别培养48 h后，进行细胞凋亡染色。最后以Western-blot测定Aβ和BDNF的表达量。
　　结果：
　　体内实验结果显示海马不同区域细胞TUNEL染色，APP/PS1氟西汀组凋亡细胞数少于 APP/PS1生理盐水组（p＜0.05），APP/PS1氟西汀组与正常鼠生理盐水组比无显著性差异(p＞0.05)，APP/PS1生理盐水组与正常鼠生理盐水组比有差异(p＜0.05)。
　　体外实验结果测得实验最适的的氟西汀浓度为10-7 mol/L。细胞凋亡染色结果显示 APP695组凋亡的细胞明显多于其他两组(p＜0.01)，与APP695+氟西汀组相比凋亡细胞增加(p＜0.05)，而WT组与APP695+氟西汀组凋亡细胞无显著性差异(p＞0.05)。Western结果显示 APP695组 Aβ表达多于其他两组(p＜0.05)而BDNF表达明显少于其他两组(p＜0.01)，与 APP695+氟西汀组相比 Aβ表达增加(p＜0.05)但 BDNF表达减少(p＜0.05)，而 WT组与氟西汀组相比Aβ和 BDNF的表达量均无显著性差异(p＞0.05)。
　　结论：
　　本研究结果提示氟西汀可以减少APP/PS1双转基因AD小鼠海马内细胞凋亡。氟西汀可以通过抑制APP695过表达Aβ，从而减少有毒Aβ对APP695细胞的影响，增加BDNF的表达量，减少神经细胞凋亡、对神经细胞起保护作用，为氟西汀治疗AD提供新的思路。

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前言

第一部分 氟西汀对APP/PS1双转基因AD小鼠保护作用的体内实验研究

1材料与方法

1.1实验材料

1.2实验方法

2实验结果

3讨论

第二部分 氟西汀对体外APP695swe细胞的保护作用机制的实验研究

1材料与方法

1.1 实验细胞及培养

1.2 主要实验器材和试剂

1.3 方法

2实验结果

3.1 CCK-8细胞活性检测

3.2细胞凋亡检测

3.3 Western

3讨论

参考文献

文献综述: 阿尔茨海默病的研究与治疗新进展

致谢

攻读硕士期间发表及待发表论文