花旗松素抑制β-catenin-Slug信号减轻乳腺癌增殖、侵袭转移和上皮间质转化的实验研究

摘要

目的：研究花旗松素对乳腺癌细胞的增殖和侵袭转移的影响，并探讨侵袭转移与上皮间质转化（epithelial to mesenchymal transition， EMT）之间的关系以及分子机制。 方法： 1.花旗松素对乳腺癌细胞增殖和侵袭转移的影响：采用不同浓度（10μM，30μM，100μM）的花旗松素干预高度侵袭转移的人源性乳腺癌细胞株MDA-MB-231和Balb/c鼠源性乳腺癌细胞株4T1。结晶紫实验和集落实验检测乳腺癌细胞的增殖能力，并用免疫细胞化学（Immunocytochemistry，ICC）检测细胞中 Ki67的表达。划痕和Transwell实验分别检测乳腺癌细胞的迁移和侵袭能力。 2.花旗松素对乳腺癌细胞侵袭转移的作用机制：花旗松素干预乳腺癌细胞株MDA-MB-231和4T1后，ICC检测Vimentin和F-actin的表达。免疫蛋白印迹法（Western Blot，WB）和实时定量逆转录-聚合酶链反应（Quantitative reverse transcription polymerase chain reaction, qRT-PCR）分别检测上皮表型分子 E-cadherin、Claudin，间质表型分子Vimentin、N-cadherin，转录因子Slug、Snail以及上游信号分子β-catenin的蛋白和mRNA的表达。进一步转染腺病毒β-catenin，划痕和Transwell实验检测乳腺癌细胞的侵袭转移能力，WB实验分别检测 E-cadherin、Claudin、Vimentin、N-cadherin、Slug、Snail以及β-catenin的蛋白表达。 3.花旗松素对小鼠原位肿瘤增殖和肺转移的影响：6-8周雌性 Balb/c小鼠随机分为模型组、花旗松素干预组。所有小鼠均皮下接种4T1细胞（1×106/只）。待原位肿瘤长至1cm3后，干预组花旗松素（100 mg/kg）四天一次灌胃，模型组不给于任何处理。28天后，处死小鼠。原位瘤组织：测量重量，免疫组织化学（Immunohistochemistry, IHC）检测Ki67和β-catenin的表达，免疫荧光（immunofluorescence, IF）检测Vimentin和Slug的表达。肺组织：转移结节计数和HE染色。 结果： 1.花旗松素抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231和4T1的增殖、侵袭和转移并呈现一定的剂量依赖性。 2.花旗松素下调乳腺癌细胞中 Vimentin的表达和改变肌动蛋白F-actin的分布。花旗松素剂量依赖性的上调了乳腺癌细胞中E-cadherin、Claudin的蛋白和 mRNA表达，下调了 Vimentin、N-cadherin、Slug、Snail和β-catenin的蛋白和mRNA表达。过表达β-catenin后，花旗松素对乳腺癌迁移和侵袭的抑制作用减弱；E-cadherin、Claudin的蛋白表达减少；Vimentin、N-cadherin、Slug、Snail和β-catenin的蛋白表达增多。 3.花旗松素抑制小鼠原位瘤的增殖及 Ki67的表达。原位瘤组织中， Vimentin、Slug及β-catenin的表达量均减少。肺组织中，转移结节的数量减少，转移灶面积减小。 结论：花旗松素可抑制乳腺癌细胞的增殖、侵袭及转移。这种抑制作用可能与β-catenin表达的下调，引起EMT相关分子表达的改变有关。

目录

声明

英汉缩略语名词对照

前言

第一部分 花旗松素对乳腺癌细胞的增殖和侵袭转移的影响

1材料和方法

2结果

3讨论

4小结

第二部分 花旗松素对乳腺癌细胞MDA-MB-231和4T1侵袭转移的作用机制

1材料和方法

2结果

3讨论

4结论

第三部分 花旗松素对小鼠原位瘤的增殖和肺转移的影响

1材料与方法

2结果

3讨论

4结论

全文总结

参考文献

文献综述:乳腺癌上皮间质转换的上游信号通路的研究进展

致谢

硕士在读期间发表的论文