CXCL13和CXCR5在难治性颞叶癫痫患者和癫痫大鼠脑组织中的表达变化

摘要

目的：
　　癫痫的发病机制目前仍然不清楚。最近的研究表明，大脑的炎症过程在癫痫形成中很常见且起到至关重要的作用。而C-X-C趋化因子配体13（CXCL13）及其唯一受体C-X-C趋化因子受体5（CXCR5）在中枢神经系统（CNS）中高度表达并参与炎症反应。本研究旨在评估CXCL13和CXCR5在难治性癫痫（IE）患者和颞叶癫痫（TLE）模型（氯化锂-匹鲁卡品点燃）大鼠的脑组织中的表达，以确定CXCL13-CXCR5信号通路在癫痫形成中的作用。
　　方法：
　　1.收集20例难治性颞叶癫痫患者的颞叶皮质标本和20例脑外伤患者的组织学正常颞叶皮质标本。
　　2.SD大鼠腹腔注射氯化锂-匹鲁卡品建立慢性癫痫模型，对照组大鼠腹腔注射生理盐水。
　　3.使用免疫荧光双标技术研究颞叶癫痫患者和癫痫大鼠脑组织中CXCL13和 CXCR5的细胞定位。实时荧光定量聚合酶链反应（RT-qPCR）、免疫组织化学、蛋白印迹方法测定各组 CXCL13和CXCR5的mRNA和蛋白表达量的变化。
　　结果：
　　免疫荧光双标结果显示 CXCL13主要表达在神经元和星形胶质细胞的细胞膜和细胞质中，而CXCR5主要表达在神经元的细胞膜和细胞质中。研究发现CXCL13和CXCR5的mRNA表达水平与蛋白表达水平在TLE患者和TLE大鼠中显着升高。此外，在匹鲁卡品癫痫模型大鼠中，CXCL13和CXCR5的蛋白表达水平在首次发作达到癫痫持续状态（SE）之后的不同时间阶段有不同的改变趋势，这些癫痫阶段包括急性期（6、24和72小时组），潜伏期（7和14天组）和慢性期（30和60天组）。
　　结论：
　　CXCL13和CXCR5在难治性颞叶癫痫患者和癫痫大鼠的脑组织中表达升高。CXCL13-CXCR5信号通路可能在 IE中发挥了致病作用。CXCL13和CXCR5可能作为一种在癫痫患者大脑中表达的潜在的炎症相关生物标志物。

目录

声明

英汉缩略语对照

前言

1 材料与方法

1.1 主要试剂与仪器设备

1.2 实验组难治性颞叶癫痫患者及对照组脑外伤患者脑标本

1.3 动物实验及分组

1.4 实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)

1.5 免疫荧光双标染色

1.6 免疫组织化学染色

1.7 蛋白免疫印迹(Western blot)

1.8 数据统计与分析

2 结果

2.1 两组患者的临床资料特征

2.2 实时荧光定量PCR检测CXCL13和CXCR5的mRNA在临床患者和SD大鼠脑组织中的表达

2.3 免疫荧光双标检测CXCL13和CXCR5在难治性颞叶癫痫患者和癫痫大鼠脑组织中的细胞定位

2.4 免疫组织化学染色检测临床患者和 SD 大鼠脑组织中CXCL13和CXCR5的表达

2.5 蛋白印迹检测CXCL13和CXCR5蛋白在临床患者和SD大鼠脑组织中的表达

3 讨论

全文总结

参考文献

文献综述：趋化因子CXCL13及其受体CXCR5在中枢神经系统的研究进展

致谢

攻读硕士学位期间发表论文