CRISPR/Cas9技术敲除faf1基因对斑马鱼软骨及肌节发育的影响

摘要

目的：
　　利用CRISPR/Cas9基因编辑技术敲除斑马鱼faf1基因，并研究faf1基因对斑马鱼发育的影响。
　　方法：
　　针对斑马鱼faf1基因设计并制备gRNA，通过显微注射技术将gRNA与Cas9 mRNA混合注入斑马鱼单细胞胚胎中，酶切和基因测序技术筛选出发生突变的F0代斑马鱼，将其与野生型斑马鱼外交得到F1代杂合体，再将同种突变类型的F1代斑马鱼自交得到F2代纯合子斑马鱼，并用显微镜观察、记录每一代斑马鱼表型。
　　结果：
　　成功制备了faf1 gRNA和Cas9 mRNA。位于faf16号外显子的gRNA6和4号外显子的gRNA7能使faf1基因发生移码突变。筛选出可遗传突变类型（mutant type1,MU1）并观察到该杂合突变型斑马鱼有体细胞色素沉积延迟、4dpf(days post fertilization,dpf)开使尾部肌节出现“结节样”表型以及头颅缩小、舌骨小角角度增大等颅面软骨畸形的变化，并于受精后8～9dpf死亡。
　　结论：
　　相对于以往文献报道中在斑马鱼中利用Morpholino(MO)敲低faf1基因产生颅面软骨变化的表型，本研究中利用CRISPR/Cas9敲除该基因产生了新的表型，即色素沉积延迟及尾部肌节部位出现“结节样”变化。为探究faf1基因功能奠定了基础，也为唇腭裂发病机制的研究提供了新线索。

目录

声明

英汉缩略语名词对照

前言

第一部分 利用CRISPR/Cas9技术建立faf1斑马鱼基因敲除模型

1材料

2方法

3结果

4讨论

第二部分 敲除faf1基因对斑马鱼软骨及肌节发育的影响

1材料

2方法

3结果

4讨论

全文总结

参考文献

文献综述:faf1基因与唇腭裂疾病研究进展

致谢

攻读学位期间发表的学术论文