光动力疗法联合顺铂对顺铂耐药肿瘤细胞的体外治疗效应

摘要

背景：铂类抗肿瘤药物是很多实体肿瘤的一线化疗药物，耐药性的产生是导致肿瘤化疗失败的重要原因。因此，需要一些新的策略来克服顺铂耐药。光动力疗法（Photodynamic therapy，PDT）是一种获得临床认可的癌症治疗方法，基于光敏剂、光照和氧气之间的光化学反应。光动力疗法分两个阶段完成，先给予光敏剂处理，随后再用适当波长的光照射局部肿瘤激活光敏剂，从而发挥抗肿瘤效应。将多种具有不同毒性作用的治疗方法联合应用，是当代肿瘤医学提高治疗疗效常用的策略。联合治疗时，由一种治疗方法诱导的抗性有可能会被另一种方法克服。
　　目的：本文将探讨光敏剂焦脱镁叶绿酸甲酯介导的光动力治疗对顺铂耐药肺癌细胞的灭活，及PDT与顺铂（DDP）的联合效应。
　　方法：采用肺癌细胞A549及其DDP耐药株A549/DDP。实验分为对照组、DDP组、PDT组和PDT+DDP组。对照组不加药物，DDP组给予14μmol/L DDP处理，PDT组给予2μmol/L MPPa、2.4 J/cm2光照处理，PDT+DDP组联合应用PDT和DDP。以CCK-8法测定细胞活性，应用Annexin V-FITC/PI双染检测细胞凋亡；2',7'-二氯荧光黄双乙酸盐（DCFH-DA）检测细胞内活性氧（ROS）水平；蛋白印迹法检测Caspase-3、Bcl-2和Bax蛋白表达。
　　结果：PDT在A549和A549/DDP细胞产生毒性，与对照组相比存活率降低（P＜0.05）；与对照组、DDP组和PDT组相比，在二株细胞中 PDT+DDP组的存活率最低（P＜0.05），定量分析联合指数分别为1.11、1.10，提示联合效应均为相加。在二株细胞中，PDT+DDP组凋亡率和细胞内ROS均高于对照组、DDP组及PDT组(P＜0.05)。蛋白质印迹法检测发现在二株细胞，与对照组相比，PDT组和 PDT+DDP组，Caspase-3和Bax蛋白表达升高，Bcl-2蛋白表达降低(P＜0.05)。
　　结论：PDT或联合DDP对耐药肺癌细胞具有明显杀伤效应，主要通过ROS?线粒体途径凋亡实现；PDT与DDP的联用效应为相加。

目录

声明

英汉缩略语名词对照

前言

1材料与方法

1.1仪器和试剂

1.2主要溶液配制

1.3细胞的培养

1.4 CCK-8法检测MPPa、光照和PDT的细胞毒性

1.5 CCK-8法检测DDP的细胞毒性

1.6 CCK-8法检测PDT联合DDP的细胞毒性

1.7荧光显微镜观察光敏剂MPPa的细胞内定位

1.8 Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡

1.9 DCFH-DA法检测细胞内ROS

1.10蛋白印迹法检测细胞凋亡相关蛋白的表达

1.11统计学分析

2结果

2.1 PDT可抑制A549、A549/DDP细胞增殖

2.2 A549/DDP细胞对DDP耐受

2.3 PDT联合DDP的细胞毒性最强

2.4 MPPa定位于细胞线粒体

2.5 PDT联合DDP提高细胞凋亡率

2.6 PDT联合DDP提高细胞内ROS水平

2.7 PDT联合DDP调节凋亡相关蛋白的表达

3讨论

4总结

参考文献

文献综述:肿瘤的光动力疗法

致谢

硕士期间发表论文