1.转化生长因子TGF-β信号调控弹性蛋白平衡在支气管肺发育不良中的机制研究；2.粪便菌群移植对新生鼠坏死性小肠结肠炎模型的疗效观察

摘要

第一部分：转化生长因子TGF-β信号调控弹性蛋白平衡在支气管肺发育不良中的机制研究
　　目的：观察转化生长因子TGF-β中和抗体（1D11）作用下，慢性高氧致新生小鼠支气管肺发育不良的肺组织形态学改变，探讨TGF-β信号在支气管肺发育不良（BPD）中发挥作用的具体途径及作用机制。
　　方法：新生24小时内的C57BL/6J小鼠随机分为4个组：空气对照组，高氧组，高氧+PBS（PBS： Phosphate buffer saline，磷酸盐缓冲液，阴性对照剂）组，高氧+1D11（TGF-β中和抗体）组，每组12只。高氧组、高氧+PBS组、高氧+1D11组分别置于氧浓度为85%的自制氧箱中，空气对照组置于同一室内空气中。高氧+1D11组于生后第3d-20d持续给予1D1140μg/μl,5μl/g，腹腔注射，每天1次；高氧+PBS组用同样的方式给予等量的PBS溶液。在第14d和第21d时分别收集各组小鼠的肺组织标本进行检测：石蜡切片H&E染色观察肺组织的形态结构；免疫组化观察弹性蛋白（Elastin）在肺组织中的分布及表达情况；ELISA检测活性TGF-β1的含量，实时荧光定量PCR（RT-PCR）检测TGF-β1、原弹性蛋白（tropoelastin）、Fibulin-5和Neutrophil elastase mRNA表达，Western blot检测TGF-β1、TGF-β信号通路转导分子（Smad-2/3、p-Smad2/3）、以及原弹性蛋白（tropoelastin）、Fibulin-5和Neutrophil elastase蛋白的表达。
　　结果：与空气对照组相比较，高氧组和高氧+PBS组的肺组织形态结构表现为：肺泡结构杂乱无章，肺泡数量显著减少，肺泡腔明显扩大，肺泡间隔增厚，次级脊减少甚至消失；弹性蛋白免疫组化结果显示：Elastin表达增多，无序沉积于肺泡间隔；TGF-β1活性明显增加；Smad-2/3蛋白表达减少而 p-Smad2/3蛋白表达增高；此外，Tropoelastin、Fibulin-5和Neutrophil elastase的mRNA及蛋白表达均不同程度增加。1D11干预后：肺泡结构明显改善，肺泡数量增多，肺泡腔变小，肺间隔变薄；Elastin表达减少，且主要集中于次级脊处；TGF-β1活性降低；Smad-2/3蛋白表达增加而p-Smad2/3蛋白表达减少；Tropoelastin、Fibulin-5和Neutrophil elastase的mRNA及蛋白表达均不同程度减少。
　　结论: TGF-β中和抗体（1D11）干预能够明显改善BPD小鼠模型的肺组织形态学结构和弹性蛋白的表达分布情况，对高氧致新生小鼠支气管肺发育不良（BPD）模型有一定的保护治疗作用。抑制TGF-β1信号通路过度激活进而调控弹性蛋白平衡系统可能是1D11对BPD小鼠发挥
　　第二部分：粪便菌群移植对新生鼠坏死性小肠结肠炎模型的疗效观察
　　目的：观察粪便菌群移植（FMT）对坏死性小肠结肠炎（NEC）新生鼠模型的疗效，为临床运用益生菌策略治疗NEC提供实验支持和理论依据。
　　方法：经人工灌胃喂养、低氧和低温刺激建立NEC新生鼠模型。实验小鼠随机分为4组：正常对照组、NEC模型组、FMT+正常组和FMT+NEC组。FMT干预：用一个洁净的圆尖硅胶管进行结肠内置管注射FMT，每天1次，持续4天。每天观察小鼠的一般情况、测量小鼠体重、统计小鼠的NEC发生率和存活率。收集小鼠的粪便，运用q-PCR方法检测分析小鼠的粪便菌群组成和含量。到日龄第5天时处死小鼠，取出肠组织，采用H&E染色观察末端回肠和盲肠组织形态学改变并作组织损伤病理学评分。
　　结果：（1）体重和一般情况：正常对照组和 FMT+正常组小鼠体重稳定增长，一般情况良好； NEC模型组小鼠体重明显降低，活动减少，反应迟钝，精神萎靡；FMT+NEC组小鼠与NEC模型组相比体重明显增加，健康状态得到改善。（2）组织形态学变化：FMT+正常组小鼠和正常对照组小鼠的肠道组织结构大体类似即末端回肠和盲肠组织结构正常，肠粘膜完好，上皮完整。NEC模型组小鼠末端回肠和盲肠组织结构紊乱，肠微绒毛脱落、坏死，肠黏膜上皮完整性破坏，可见较多炎性细胞浸润。FMT+NEC组小鼠末端回肠和盲肠的组织结构得到明显改善，粘膜的破坏减少，炎性细胞浸润减少。（3）小鼠的NEC发生率：FMT处理组与对照组小鼠相比NEC的发生率明显减少。（4）小鼠生存率和病理学评分统计结果：与NEC模型组相比，FMT治疗组小鼠的病理学评分明显降低，生存率明显提高。（5）粪便菌群分析：NEC模型组小鼠细菌总数减少、细菌多样性降低，FMT治疗后能扭转这种变化。
　　结论:成功构建了 C57BL/6J新生鼠 NEC模型，粪便菌群移植（FMT）可以改善NEC小鼠肠道组织的病理结构，调节NEC小鼠的肠道菌群定植情况，对NEC小鼠模型有一定的治疗作用。

目录

声明

英汉缩略语名词对照

第一部分：转化生长因子TGF-β信号调控弹性蛋白平衡在支气管肺发育不良中的机制研究

前言

1材料和方法

2结果

3讨论

结论

参考文献

附图

第二部分 粪便菌群移植对新生鼠坏死性小肠结肠炎模型的疗效观察

前言

1材料和方法

2结果

3讨论

结论

参考文献

附图

文献综述:TGF-β信号通路与支气管肺发育不良（BPD）

致谢

攻读硕士期间发表的论文