抑癌基因TET1通过DACT2和SFRP2去甲基化调控Wnt/β-catenin通路抑制鼻咽癌生长的研究

摘要

目的: 鼻咽癌虽然在全世界人口中的发病率比较低，但是在中国南方的发病率却很高。通过早期放疗及晚期放化疗结合治疗，鼻咽癌的生存率明显提高，但是仍然存在一些远处转移和复发。抑癌基因TET1（10-11易位甲基胞嘧啶双加氧酶-1）能够催化5-甲基胞嘧啶转化为5-羟甲基胞嘧啶，从而使抑癌基因去甲基化而恢复其表达，最终抑制癌症的发生发展。本文的目的是探讨TET1在鼻咽癌中是否具有抑癌作用，以及探寻其作用的具体分子机制，为鼻咽癌的临床诊治提供理论基础。 方法: 通过 HE和免疫组化染色实验检测来自鼻中隔偏曲患者的正常鼻组织和鼻咽癌组织中TET1和5-hmC的表达及细胞定位；通过qRT-PCR实验检测 TET1在鼻咽癌组织和正常鼻组织中 mRNA的表达水平；RT-PCR和MSP实验检测去甲基化药物5-Aza和组蛋白去乙酰化酶抑制剂TSA处理后鼻咽癌细胞株中TET1的表达水平和甲基化状态；MSP和BGS检测TET1在鼻咽癌组织、癌旁组织及鼻咽癌细胞中的甲基化水平。将TET1-CD、TET1-CD-mut质粒转染HNE1和HONE1细胞表达后，用克隆形成、MTS、流式、划痕以及 Trans-well实验分别检测 TET1在鼻咽癌细胞中对增殖、周期阻滞、细胞凋亡、迁移和侵袭的作用；qRT-PCR和免疫荧光方法检测TET1对EMT中关键分子表达的影响；Western blot、Luciferase Reporter Assay和免疫荧光染色实验检测TET1在鼻咽癌中对Wnt/β-catenin信号通路的影响；Dot-blot、qRT-PCR和MSP检测TET1对Wnt/β-catenin信号通路的靶基因的影响。 结果: 与正常鼻组织和鼻咽癌旁组织相比，TET1在鼻咽癌组织及细胞中发生高甲基化且表达下降。使用 Aza+TSA药物处理后，TET1的表达恢复。表明TET1在鼻咽癌中是由于启动子高甲基化而表达下降。通过在HNE1和HONE1细胞株中过表达TET1-CD后，显示TET1可以抑制鼻咽癌细胞的增殖，使细胞周期阻滞于G0-G1期并诱导细胞凋亡，并通过抑制EMT从而抑制鼻咽癌细胞的迁移和侵袭，表明了TET1在鼻咽癌中发挥抑癌基因的作用。TET1主要通过使 WNT拮抗因子（DACT2和SFRP2）去甲基化后恢复表达，抑制核β-catenin的活性和下游靶基因的表达，进而抑制Wnt/β-catenin信号通路，最终抑制鼻咽癌的发生发展。 结论: TET1通过引起WNT拮抗因子（DACT2和SFRP2）的去甲基化来抑制Wnt/β-catenin信号通路，在鼻咽癌中发挥抑癌作用。TET1可能作为鼻咽癌的一个生物标记物，为提高鼻咽癌的临床诊断及分子治疗奠定了理论基础。

目录

声明

英汉缩略语名词对照

前言

第一部分 检测TET1在鼻咽癌组织及细胞株中的表达水平和甲基化状态

1材料

2方法

3结果

第二部分 TET1在鼻咽癌细胞中的生物学功能研究

1材料

2方法

3结果

第三部分 探索TET1在鼻咽癌中发挥抑癌作用的机制

1材料

2方法

3结果

全文讨论

全文总结

参考文献

文献综述:抑癌基因TET1在肿瘤发生发展中的表观遗传学调控

致谢

硕士期间发表论文