二甲双胍通过干预上皮-间质转化逆转尼古丁诱导的肺癌吉非替尼耐药

摘要

目的: 本研究探讨尼古丁（nicotine,NIC）诱导EGFR敏感突变PC-9肺癌细胞株吉非替尼耐药及二甲双胍对其作用。 方法: PC-9分成不同组，空白组，尼古丁组，二甲双胍组，二甲双胍和尼古丁组，SB431542组，SB431542和尼古丁组。利用实时荧光定量PCR检测E-cadherin和Vimentin RNA表达，Western blot检测E-cadherin和 Vimentin蛋白表达，p-Smad2,Smad2蛋白。CCK-8检测不同分组细胞对吉非替尼药物敏感情况。Transwell小室实验检测细胞侵袭迁移。 结果: 尼古丁诱导 PC-9细胞上皮间质转化呈时间浓度依赖，在10μmol/L尼古丁处理72h后，发生E-cadherin的下调和Vimentin的上调最明显，故选该条件做以下实验。CCK-8提示，相比空白组，尼古丁组PC-9细胞对吉非替尼敏感性减弱，在吉非替尼浓度为0.05μmol/L最明显（P=0.000）。Matrigel侵袭实验提示尼古丁组穿膜细胞数较空白组明显增多[（15.7±1.53）个/高倍视野 vs.（32.7±2.08）个/高倍视野, F=75.406，P=0.000,P=0.000];迁移实验的结果与之相似。与空白组相比，尼古丁组E-cadherin mRNA表达水平明显降低[（0.932±0.100）vs.（0.459±0.024），F=25.924，P=0.000,P=0.000)], Vimentin mRNA表达水平明显升高[（1.200±0.200）vs.(1.973±0.129)，F=20.998，P=0.000,P=0.000]。蛋白水平变化与之相同。二甲双胍+尼古丁组相比于尼古丁组，p-Smad2蛋白表达降低，SB431542组+尼古丁组改变同上。二甲双胍+尼古丁组可以增加尼古丁作用 PC-9对吉非替尼的敏感性，在吉非替尼浓度为0.05μmol/L,0.1μmol/L,0.5μmol/L,1μmol/L,5μmol/L时有统计学意义，SB431542+尼古丁组同上。二甲双胍+尼古丁组可以减弱尼古丁组的穿膜数[（17.0±2.00）个/高倍视野 vs.32.7±2.08）个/高倍视野，F=75.406，P=0.000,P=0.000]，迁移实验呈现相同的结果，SB431542+尼古丁组相比尼古丁组细胞穿模数减少(P＜0.05)。相比于尼古丁组，二甲双胍+尼古丁组上调E-cadherin mRNA[（0.459±0.024） vs.（0.838±0.058）， F=25.924， P=0.000,P=0.000)]，下调Vimentin mRNA[（1.973±0.129）vs.（1.467±0.115），F=20.998，P=0.000,P=0.003)],SB431542+尼古丁组上调E-cadherin mRNA，下调Vimentin mRNA，相比于尼古丁组(P＜0.05)。 结论: 尼古丁通过上皮间质转化诱导PC-9细胞吉非替尼耐药，二甲双胍和SB431542可以逆转上述现象。

目录

英汉缩略语名词对照

前言

第一部分二甲双胍缓解尼古丁诱导人肺腺癌细胞株PC-9 吉非替尼耐药及相关机制研究

1引言

2材料与方法

3结果

4.讨论

第二部分SB431542逆转尼古丁诱导的 PC-9 细胞吉非替尼耐药

1引言

2 材料与方法

3结果

4.讨论

全文总结

参考文献

文献综述:尼古丁与肺癌

致谢

硕士期间发表的文章