Gli1和Gli2对BMP9诱导间充质干细胞成骨分化的影响

摘要

目的：探讨Hedgehog信号重要转录因子Gli1和Gli2对骨形态发生蛋白9（Bone Morphogenetic Proteins9, BMP9）调控间充质干细胞（Mesenchymal Stem Cells, MSCs）成骨分化的影响。 方法：用BMP9腺病毒处理C3H10T1/2细胞，定量PCR检测Gli1和Gli2的内源性表达。随后,碱性磷酸酶（Alkaline phosphatase, ALP）染色检测不同浓度Gli1和Gli2抑制剂（GANT61）对BMP9调控间充质干细胞早期成骨分化指标碱性磷酸酶（ALP）的影响；之后，碱性磷酸酶（ALP）染色和活性测定检测合适浓度的Gli1和Gli2抑制剂（GANT61）对BMP9调控MSCs早期成骨分化指标ALP的影响；茜素红 S染色检测晚期成骨指标钙盐沉积；RT-qPCR检测BMP9下游成骨相关基因Dlx5、Runx2、Osterix和骨钙素（Osteocalcin, Ocn）的表达；Western Blot检测RUNX2、骨桥蛋白（ Osteopontin, OPN）和骨钙素OCN的变化；最后Western Blot检测BMP9经典信号通路中Smad1/5/8和非经典信号通路丝裂原活化激酶（Mitogen Activated Protein Kinases, MAPKs）中ERK1/2和p38的总蛋白与磷酸化蛋白水平的差异。 结果：在C3H10T1/2细胞中，BMP9促进Gli1和Gli2的表达。4μM的Gli1和Gli2抑制剂（GANT61）对BMP9诱导的间充质干细胞后，抑制了BMP9诱导的碱性磷酸酶、钙盐沉积，同时也抑制了BMP9介导的成骨相关转录因子Dlx5、Runx2、Osterix、Ocn在mRNA水平的表达；抑制了RUNX2、OPN和OCN的蛋白表达。Gli1和Gli2抑制剂（GANT61）对BMP9诱导的ERK1/2的磷酸化没有影响，但抑制了BMP9诱导的Smad1/5/8和p38的磷酸化。 结论：Gli1和Gli2可调控BMP9诱导的间充质干细胞成骨分化。

目录

声明

英汉缩略语名词对照

前言

1.1 主要材料

1.2 实验方法

2 实验结果

2.1 BMP9影响C3H10T1/2细胞中Gli的内源性表达

2.2 抑制Gli1和Gli2对BMP9诱导MSCs成骨分化早期指标ALP的影响

2.3 抑制Gli1和Gli2对BMP9诱导的MSCs成骨分化晚期指标钙盐沉积的影响

2.4 抑制Gli1和Gli2对BMP9的下游成骨相关转录因子的mRNA表达水平的影响

2.5 抑制Gli1和Gli2对BMP9介导的成骨相关转录因子的蛋白表达水

2.6 抑制Gli1和Gli2对BMP9成骨分化中相关信号通路的影响

3 讨论

全文总结

参考文献

文献综述:Gli蛋白家族与骨发育的研究进展

致谢

攻读硕士期间发表的学术论文