维生素A缺乏通过RARα抑制神经干细胞增殖影响HIBD大鼠神经功能修复的机制研究

摘要

目的： 探讨维生素A缺乏（VA）是否通过视黄酸核受体α（RARα）调控Wnt/β-catenin信号通路影响HIBD后神经干细胞增殖，进而影响神经功能预后。 方法： 体内实验采用维生素Ａ缺乏饲料和维生素Ａ正常饲料分别构建VA缺乏（VAD），VA正常(VAN)的新生Sprague-Dawley(SD)大鼠。随机选取30只VAD新生模型鼠作为VAD组。选取60只VAN新生模型鼠随机分为VAN组和假手术组，每组30只。VAN组和VAD组采用经典Rice法建立HIBD模型，假手术组只做颈部皮肤切开缝合；术后28d行 Morris水迷宫实验检测定位巡航能力及空间记忆力(n=20)；术后3天取大鼠脑组织行石蜡切片(n=5)，用Edu细胞增殖染色评估细胞新生的能力，并通过 Nestin免疫荧光标记，了解神经干细胞增殖的水平；术后3天收集各组左侧海马组织（n=5），运用 Real-time PCR、Western blot法检测相关通路关键性因子表达水平。体外实验建立PC12细胞OGD模型，不同视黄酸（RA）浓度（1μmol/L、5μmol/L、20μmol/L）干预，利用CCK-8试剂盒检测OGD后12h、24h、36h、48h细胞增殖活性，流式细胞术检测各组OGD后24h的细胞周期情况。运用Real-time PCR和Western blot技术检测OGD后24h各组细胞RARα，AKT, GSK-3β，β-catenin，Cyclin D1的mRNA和蛋白表达情况。 结果： Morris水迷宫实验结果显示，VAD组大鼠在各时间点的逃避潜伏期均长于VAN组（P＜0.05），且第7天穿越平台次数少于VAN组（P＜0.05）；术后3d，VAD组海马CA1、CA3、DG的EdU阳性细胞和Nestin阳性细胞显著少于VAN组。Real-time PCR和Western blot结果显示，VAD组的 RARα，AKT, GSK-3β，β-catenin，Cyclin D1的mRNA表达水平均低于VAN组(P＜0.05)，蛋白表达水平与PCR结果基本一致。CCK-8和流式细胞周期检测结果显示，PC12细胞OGD后增殖活性有所下降（P＜0.05），且G0/G1期细胞比例增加(P＜0.05)；与OGD组相比，1μmol/L RA、5μmol/L RA干预组均有较高的细胞增殖活性， G0/G1期细胞比例有所下降(P＜0.05)。尤5μmol/L RA干预组作用效果显著；而20μmol/LRA组细胞增殖活性较OGD组降低，G0/G1期细胞比例较OGD组明显增加(P＜0.05)；Real-time PCR和Western blot结果显示，5μmol/LRA组的RARα，AKT,β-catenin，Cyclin D1的mRNA表达水平及RARα，AKT，p-AKT，GSK-3β，β-catenin，Cyclin D1的蛋白表达水平均高于OGD组(P＜0.05)。 结论： VAD将抑制HIBD后的神经组织功能修复；其病理生理机制之一是VAD抑制海马神经干细胞增殖；分子机制为低水平RA信号通过RARα抑制AKT和GSK-3β活性，影响β-catenin信号，下调Cyclin D1的表达，进而抑制神经干细胞的增殖。

目录

声明

英汉缩略语名词对照

前言

参考文献

第一部分 体内探讨维生素A缺乏影响HIBD大鼠神经功能修复机制

1主要材料与方法

2结果

3讨论

4小结

参考文献

第二部分 体外RA影响氧糖剥夺后的PC12细胞增殖机制研究

1主要材料与方法

2结果

3讨论

4小结

参考文献

全文总结

文献综述:Wnt信号通路在神经系统中的作用

致谢

攻读硕士学位期间发表的文章及会议交流论文