MARCH8对卵巢癌生长转移的促进作用及对Wnt/β-catenin信号通路的研究

摘要

目的： 检测MARCH8在卵巢癌和正常卵巢组织中的表达情况，研究沉默MARCH8基因后对人卵巢癌细胞株SKOV3侵袭，迁移与增殖的影响，并探究其可能的作用机制。 方法： （1）采用免疫组织化学的方式检测MARCH8在上皮性卵巢癌组织和卵巢癌旁正常组织中的表达情况，并探索卵巢上皮性癌组织中MARCH8的表达与卵巢癌临床病理特征之间的关系。 （2）采用qPCR和Western blot方法检测沉默MARCH8基因后MARCH8在卵巢癌细胞株SKOV3中的表达情况。 （3）采用Transwell实验和划痕实验检测沉默MARCH8基因后对卵巢癌细胞株SKOV3侵袭和迁移能力的影响。 （4）采用CCK8实验和细胞克隆实验检测沉默MARCH8基因后对卵巢癌细胞株SKOV3增殖和细胞克隆形成能力的影响。 （5）采用荧光素酶实验检测沉默MARCH8基因后对Wnt/β-catenin通路活性的影响；采用Western blot实验检测沉默MARCH8基因后β-catenin和E-cadherin蛋白的表达情况；采用免疫荧光实验检测沉默MARCH8基因后对β-catenin入核的影响。 （6）采用裸鼠皮下成瘤实验检测卵巢癌细胞株SKOV3在沉默MARCH8基因后裸鼠成瘤能力的改变。 结果： （1）MARCH8在上皮性卵巢癌组织中的表达明显高于其在卵巢癌旁正常组织中的表达（P＜0.05）。在卵巢上皮性癌组织中，MARCH8的表达与年龄，卵巢癌分期，分级以及病理分型中均没有关系（P＞0.05)。 （2）沉默MARCH8基因后，MARCH8在卵巢癌细胞株SKOV3中的表达明显降低（P＜0.05）。 （3）Transwell实验和划痕实验结果提示沉默MARCH8基因后，卵巢癌细胞株SKOV3的侵袭和迁移能力明显下降（P＜0.05）。 （4）CCK8实验和细胞克隆实验结果提示沉默MARCH8基因后，卵巢癌细胞株SKOV3的细胞增殖能力和细胞克隆形成能力明显下降（P＜0.05）。 （5）在卵巢癌细胞株 SKOV3中沉默MARCH8基因后，Wnt/β-catenin信号通路活性下降，β-catenin表达下降（P＜0.05），E-cadherin表达上升（P＜0.05）。且β-catenin入核能力也明显下降（P＜0.05）。 （6）卵巢癌细胞株SKOV3在沉默MARCH8基因后，裸鼠皮下形成的移植瘤的体积明显下降（P＜0.05）。 结论： 沉默MARCH8可以抑制卵巢癌细胞侵袭，迁移和增殖等细胞生物学行为，其机制可能与Wnt/β-catenin通路有关。提示MARCH8在卵巢癌中可能起着促进肿瘤发生发展的作用。

目录

声明

英汉缩略语名词对照

前言

1 材料与方法

1.1 实验材料

1.2 试剂

1.3 主要试剂配置

1.4 主要仪器

1.5 实验方法

1.6 统计分析

2 结果

2.1 MARCH8在人卵巢癌组织中过表达

2.2 沉默MARCH8后MARCH8在卵巢癌细胞株SKOV3中的表达情况

2.3 沉默MARCH8对卵巢癌细胞株SKOV3侵袭和迁移能力的影响

2.4 沉默MARCH8对卵巢癌细胞株SKOV3增殖和克隆形成能力的影响

2.5 沉默MARCH8对Wnt/β-catenin通路活性的影响

2.6 沉默MARCH8后对β-catenin蛋白与E-cadherin蛋白的影响

2.7 下调MARCH8表达抑制β-catenin向细胞核内转移

2.8 沉默MARCH8抑制肿瘤在裸鼠体内的生长

3 讨论

参考文献

文献综述:MARCH家族与肿瘤

致谢

攻读硕士研究生期间发表的文章