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【6h】

HBx基因对小鼠肝脏细胞凋亡和周期影响的体内研究

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前言

参考文献

第一部分 构建稳定表达HBx的肝前体细胞株及动物模型

1实验材料

1.1细胞

1.2动物

1.3主要仪器

1.4主要试剂

1.5主要试剂配制

2实验方法

2.1细胞培养

2.2感染HBx肝前体细胞株的构建

2.3动物模型的构建

2.4实时聚合酶链反应(Quantitative real time polymerase chain reaction,qRT-PCR)

2.5蛋白质印迹法(Western blotting;WB)

2.6免疫组化法(Immunohistochemistry;IHC)

2.7统计分析

3实验结果

3.1 HBx在肝前体细胞中表达

3.2 HBx在小鼠模型中表达

4讨论

参考文献

第二部分 HBx抑制小鼠肝脏细胞凋亡并上调细胞周期调控因子的表达

1实验材料

1.1主要仪器

1.2主要试剂

2实验方法

2.1荧光TUNEL实验

2.2实时聚合酶链反应(Quantitative real time polymerase chain reaction,qRT-PCR)

2.3蛋白质印迹法(Western blotting;WB)

2.4统计分析

3实验结果

3.1 HBx抑制小鼠肝脏细胞凋亡

3.2 HBx下调促凋亡因子caspase-9和Bad的表达,上调抗凋亡因子Bcl-xl的表达

3.3 HBx上调肝脏细胞周期调控因子CDK2、cyclinD1和cyclinE的表达

4讨论

参考文献

第三部分 HBx影响小鼠肝脏细胞凋亡和周期调控因子表达的分子机制

1实验材料

1.1主要仪器

1.2主要试剂

2实验方法

2.1 HBx-EGFP-14-19组小鼠喂养Akt磷酸化抑制剂MK-2206

2.2荧光TUNEL实验

2.4蛋白质印迹法(Western blotting;WB)

3实验结果

3.1 HBx上调p-Akt、p-mTOR的表达

3.2 MK-2206作用于HBx-EGFP-14-19组小鼠使肝脏细胞p-Akt、p-mTOR表达水平降低

3.3 MK-2206可显著扭转HBx对小鼠肝脏的抗凋亡作用

3.4 MK-2206可显著扭转HBx下调促凋亡因子caspase-9和Bad的表达,上调抗凋亡因子Bcl-xl的表达的作用

3.5 MK-2206可显著扭转HBx上调小鼠肝脏细胞周期调控因子CDK2、cyclinD1和cyclinE表达的作用

4讨论

参考文献

全文总结

文献综述:HBx在原发性肝癌中的研究现状

致谢

攻读硕士期间发表论文

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