声明
英汉缩略语名词对照
前言
1. 肺癌的不良预后与化疗耐药相关
2. 肺癌干细胞与肺癌耐药
3. 肿瘤干细胞与耐药相关机制
4. MAPK信号通路与肿瘤耐药
1 材料和方法
1.1 实验材料
1.1.1 实验细胞
1.1.2 实验质粒及菌株
1.1.3 实验动物
1.1.4 临床样本
1.1.5 实验耗材
1.1.6 实验试剂
1.2 实验仪器
1.3 实验方法
1.3.1 细胞培养
1.3.2细胞复苏
1.3.3 细胞传代
1.3.4 细胞冻存
1.3.5 流式凋亡检测
1.3.6 RT-qPCR
1.3.7 CCK-8耐药分析
1.3.8 Western blot
1.3.9 siRNA转染
1.3.10 shRNA慢病毒包装
1.3.11 shRNA慢病毒包装及LV4过表达慢病毒转染
1.3.12 裸鼠顺铂耐药性测定
1.3.13 临床样本验证验证实验
1.3.14 TCGA公用数据库分析
1.3.15 GSEA分析
1.3.16 Oncomine
1.3.17 生存分析
1.3.18 统计
2 实验结果
2.1 肺腺癌干细胞的多药耐药表现
2.1.1 LLC-Parental细胞与LLC-SD细胞耐化疗药物敏感性的鉴定
2.1.2 介导LLC-SD细胞与LLC-Parental细胞耐药基因的鉴定
2.1.3抑制剂Ezatiostat抑制Gstp1对顺铂耐药的的影响
2.2 LLC-SD细胞中阻断Gstp1在体外和体内均可逆转顺铂耐药性
2.2.1慢病毒介导的Gstp1敲低和过表达系统的建立及效率验证
2.2.2 Gstp1在LLC-SD细胞中调节顺铂敏感性
2.2.3 Gstp1在体内调节LLC-SD对顺铂的敏感性
2.3 MEK/ERK信号通路介导LLC-SD细胞的顺铂耐药性
2.3.1 抑制剂PD98059抑制MEK/ERK通路对Gstp1表达的影响
2.3.2 MEK/ERK抑制剂降低了LLC-SD对顺铂的耐药能力
2.3.3 LLC-SD细胞经顺铂处理后，MEK/ERK信号通路被激活
2.4 干扰 MEK/ERK 信号通路恢复了 LLC-SD 细胞对顺铂的敏感性
2.4.2 MEK/ERK通路干扰后的LLC-SD细胞，经顺铂处理后凋亡率增高
2.4.3 Mek1/2敲低恢复LLC-SD细胞在体内成瘤后对顺铂的敏感性
2.5 LLC-SD-shMek1/2细胞中Gstp1的过表达恢复了对顺铂的耐药
2.5.1 Gstp1在shMek1/2细胞中的过表达恢复了体外对顺铂的耐药
2.5.2 Gstp1在shMek1/2细胞中的过表达恢复了体内对顺铂的耐药
2.6 人肺癌细胞系及衍生干细胞系的验证
2.6.1 Gstp1在H1299-SD细胞中调节顺铂敏感性
2.6.2 阻断Gstp1诱导顺铂处理的H1299-SD细胞凋亡
2.6.3 MEK/ERK抑制剂处理使H1299-SD对顺铂敏感
2.7 高 Gstp1 mRNA 水平与肺腺癌的疾病进展和较差的生存率有关
2.7.1 高Gstp1 mRNA水平与肺腺癌的疾病进展有关
2.7.2 Gstp1 mRNA水平与肺腺癌分期相关
2.7.3 高Gstp1 mRNA水平与肺腺癌的低生存率有关
3 讨论
全文小结
参考文献
文献综述:肿瘤干细胞耐药的研究进展
致谢
攻读硕士期间发表论文
