抗尖吻蝮蛇毒卵黄抗体的制备与纯化及其中和活性研究

摘要

抗毒血清是目前治疗蛇伤的唯一特效药，然而，其生产的高成本、低得率及引发诸多副作用（过敏性休克、致热反应及血清病等）等不足，使得寻找更理想的蛇毒解毒剂变得十分迫切。因卵黄抗体（IgY）具有生产成本低、产量高、安全性好等优点，成为开发新蛇毒解毒剂的重要研究对象,它被认为是一种可能替代抗蛇毒血清的新型解毒剂。本研究通过免疫白来航鸡，从其所产鸡蛋中成功制备出抗尖吻蝮蛇毒 IgY，并对其中和活性及口服可行性进行了分析。获得主要结论如下：
　　①从初次免疫结束到第4周，抗尖吻蝮蛇毒IgY的活性逐渐增强，在第4周达到最高水平并维持至免疫过程终止。鸡血清抗体活性与IgY活性变化一致。
　　②采用“辛酸-硫酸铵”法批量纯化IgY，IgY的分子量为180kDa，其中轻链为25 kDa，重链为65 kDa，IgY的产量为101.66mg IgY/蛋。
　　③间接ELISA法测定抗尖吻蝮蛇毒IgY的效价为1:80000，免疫双向扩散测定其效价为1:16。
　　④抗尖吻蝮蛇毒IgY能与白唇竹叶青及黑眉蝮蛇毒发生交叉反应，不能同眼镜蛇及银环蛇毒发生交叉反应。尖吻蝮蛇毒可能与白唇竹叶青蛇毒或黑眉蝮蛇毒这类同属一个亚科的蛇毒含有的共同抗原决定簇多，而与银环蛇毒或眼镜蛇毒这类来自于眼镜蛇科的蛇毒含的共同抗原决定簇极少。
　　⑤抗尖吻蝮蛇毒IgY能中和尖吻蝮蛇毒的PLA2活性、5’-核苷酸酶活性、透明质酸酶活性、纤维蛋白原凝结活性、纤维蛋白水解活性、CK酶活性、蛋白水解酶活性、出血活性、水肿活性以及3×LD50蛇毒对小鼠的攻击等，并且本身无酶活性及毒性。
　　⑥抗蛇毒IgY是非有毒物类。采用ELISA及Western blot均未能从灌胃的小鼠血清中检测到活性IgY。
　　本研究成功制备出抗尖吻蝮蛇毒 IgY，其中和能力强，是一种极富前景的蛇毒解毒剂。但本文对IgY口服可行性的研究还不够深入，有待进一步论证。

目录

1引言

1.1研究目的和意义

1.2 本研究的主要内容

1.3本研究的技术路线

2蛋鸡免疫与纯化

2.1材料与方法

2.2结果

2.3讨论

3抗尖吻蝮蛇毒IgY的免疫化学分析

3.1材料与方法

3.2结果

3.3讨论

4抗尖吻蝮蛇毒IgY的中和能力分析

4.1材料与方法

4.2结果

4.3讨论

5灌胃实验

5.1材料与方法

5.2结果

5.3讨论

6全文总结

7文献综述:卵黄抗体(IgY)及其在蛇伤治疗中的研究进展

参考文献

附录

致谢

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