聚乙二醇修饰重组人干扰素ω的药代动力学研究

摘要

本论文以与企业合作开发的聚乙二醇修饰重组人干扰素ω(PEG-rhIFN-ω)为研究对象,初步探讨PEG-rhIFN-ω在体内的药代动力学和组织分布,以期掌握PEG-rhIFN-ω在体内的动态变化规律,为临床安全用药和合理用药提供依据和参考。论文以小鼠作为实验材料,通过静脉注射重组人干扰素ω(rhIFN-ω)和PEG-rhIFN-ω,采用ELISA双抗体夹心法(Double antibody sandwich, DAS-ELISA)从血药浓度-时间关系和组织分布角度分析聚乙二醇(polyethyleneglycol, PEG)修饰对rhIFN-ω药代动力学的影响,获得了主要的结论如下:①制备了rhIFN-ω抗体和辣根过氧化物酶(HRP)标记rhIFN-ω抗体,建立了测定小鼠体内rhIFN-ω和PEG-rhIFN-ω的血药浓度及组织中浓度的ELISA双抗体夹心法。②采用ELISA双抗体夹心法研究了小鼠经静脉注射PEG-rhIFN-ω和rhIFN-ω3个剂量(5μg/kg、3μg/kg、1μg/kg)后的血药浓度-时间曲线,并应用房室模型方法对rhIFN-ω和PEG-rhIFN-ω的药代动力学参数进行估算,结果表明rhIFN-ω和PEG-rhIFN-ω在小鼠的体内过程均符合一级消除动力学的二房室模型。rhIFN-ω的消除半衰期(t1/2β)为0.866±0.18h,PEG-rhIFN-ω为2.86±0.27h,是rhIFN-ω的3.30倍。rhIFN-ω的消除速率常数β,消除率CL,中央室向体外消除速率常数k10和表观分布容积Vd分别为0.799h-1,0.416mL/h·kg,4.38h-1,和9.81L/kg,PEG-rhIFN-ω为0.244h-1,0.492mL/h·kg,1.40h-1和11.80L/kg,说明PEG修饰能够明显延长rhIFN-ω的生物半衰期(t1/2)。③采用ELISA双抗体夹心法测定了小鼠经静脉注射rhIFN-ω和PEG-rhIFN-ω5μg/kg后不同时间段肝、脾、肾、心、肺、胃和膀胱等重要组织中的浓度,结果显示除了肾脏和心以外,PEG-rhIFN-ω在其他各组织中的分布比rhIFN-ω高,PEG修饰可以提高rhIFN-ω在组织中的利用率,PEG修饰可以明显改变rhIFN-ω在体内的分布比例,特别是PEG-rhIFN-ω在肝脏的分布增加,说明具有较强的组织针对性。

目录

摘要

ABSTRACT

1 绪论

1.1 研究背景

1.1.1 概述

1.1.2 蛋白质的 PEG 修饰

1.1.3 PEG 化对蛋白多肽药物药代动力学的影响

1.1.4 蛋白多肽类药物药代动力学的分析方法

1.1.5 干扰素ω的研究（Interferon omega，IFN-ω）

1.2 选题背景

1.3 研究目的和意义

1.4 研究内容

1.4.1 技术路线

1.4.2 抗体的制备

1.4.3 血药浓度－时间曲线

1.4.4 组织分布研究

1.5 创新点

2 实验方法

2.1 概述

2.1.1 ELISA 分类

2.1.2 ELISA 特点

2.2 试验材料和仪器

2.2.1 材料与试剂

2.2.2 实验试剂的配制

2.2.3 实验动物

2.2.4 仪器与设备

2.3 rhIFN-ω 抗体的制备

2.3.1 概述

2.3.2 实验方法

2.3.3 结果与分析

2.4 rhIFN-ω 抗体的纯化与检测

2.4.1 概述

2.4.2 实验方法

2.4.3 结果与分析

2.5 rhIFN-ω 抗体的标记

2.5.1 概述

2.5.2 试验方法

2.5.3 结果与分析

2.6 结论

3 小鼠体内的药代动力学实验

3.1 概述

3.2 材料与试剂

3.3 实验动物

3.4 仪器与设备

3.5 标准曲线的备

3.5.1 rhIFN-ω标准曲线的制备

3.5.2 PEG-rhIFN-ω标准曲线的制备

3.6 给药方案与样品采集

3.7 血药浓度测定

3.8 结果与分析

3.8.1 血药浓度－时间曲线

3.8.2 药代动力学参数分析

3.9 结论

4 小鼠体内组织分布实验

4.1 概述

4.2 材料与试剂

4.3 实验动物

4.4 仪器与设备

4.5 标准曲线的制备

4.5.1 rhIFN-ω标准曲线的制备

4.5.2 PEG-rhIFN-ω标准曲线的制备

4.6 给药方案与样品采集

4.7 组织匀浆

4.8 组织浓度测定

4.9 结果与分析

4.10 结论

5 结论与展望

5.1 结论

5.2 展望

致谢

参考文献

附录：作者在攻读硕士学位期间发表的论文目录