苦参碱葡萄糖注射液细菌内毒素检查方法研究

摘要

苦参碱葡萄糖注射液现行质量标准为国家食品药品监督管理局批准的试行标准,根据该试行标准规定,该产品的热原检查用家兔法。苦参碱葡萄糖注射液为苦参碱与葡萄糖的灭菌水溶液,适用于慢性肝炎的氨基转移酶及胆红素异常。由于苦参碱葡萄糖注射液有一定的刺激性,在进行热原实验时常引起家兔的躁动,容易对实验结果产生影响。故本研究的目的就是参照药品细菌内毒素检查的实验设计对以细菌内毒素检查法取代热原检查法的可行性进行实验研究,并建立苦参碱葡萄糖注射液细菌内毒素检查方法,为该产品的质量标准转正提供数据支持。细菌内毒素检查法是利用鲎试剂来检测或量化由革兰阴性菌产生的细菌内毒素,以判断供试品中细菌内毒素的限量是否符合规定的一种方法。细菌内毒素检查包括两种方法,即凝胶法和光度测定法。后者包括浊度法和显色基质法。自20世纪60年代鲎血凝集机制的发现和鲎实验方法的建立,引起了各国药政管理部门的极大兴趣,并使细菌内毒素检查法在药品的热原限量控制中得到了广泛的应用和发展。特别是《中国药典》2005年版细菌内毒素检查法正式收载,使细菌内毒素定量检查法在我国得到肯定、应用和推广,它还将有力地推动细菌内毒素检查法在我国的新进展。本研究从细菌内毒素基础知识着手,介绍了细菌内毒素的概念、化学结构及化学组份、生物活性、耐热性、致病机理及作用机理等基础理论。参照《中国药典》2005年版二部附录XI E细菌毒素检查法的要求,通过试验摸索,该产品采用凝胶法在稀释2倍后不干扰细菌内毒素试验;采用动态比浊法,对该产品稀释液进行定量检测,在8倍稀释时无干扰作用,从而确立了苦参碱葡萄糖注射液细菌内毒素检查方法。同时对细菌内毒素检查法的常见可能影响因素进行了分析,并对采取的相应对策进行了摸索、探讨。最后研究结果建立的细菌内毒素检查法快速、简便、重复性好、灵敏度高,苦参碱葡萄糖注射液采用细菌内毒素检查法代替热原检查法,方法可行,并能进行定量检测。

目录

摘要

ABSTRACT

1 绪论

1.1 研究目的

1.2 苦参碱葡萄糖注射液简介

1.3 研究方法

2 细菌内毒素检查的基础理论

2.1 细菌内毒素

2.1.1 细菌内毒素化学结构及化学组份

2.1.2 内毒素的生物学活性

2.1.3 细菌内毒素与热原的关系

2.1.4 标准内毒素与环境内毒素

2.1.5 凝集反应机理

2.2 鲎试剂

2.2.1 鲎

2.2.2 鲎试剂

2.3 细菌内毒素检查用水

3 细菌内毒素检查方法学研究

3.1 细菌内毒素检查法

3.2 细菌内毒素检查法的建立

3.2.1 细菌内毒素检查方法建立的主要步骤

3.2.2 细菌内毒素检查方法建立时注意事项及常见问题

4 苦参碱葡萄糖注射液细菌内毒素检查法的建立

4.1 苦参碱葡萄糖注射液细菌内毒素检查法—凝胶法

4.1.1 试剂与药品

4.1.2 试验方法与结果

5 动态浊度法检测苦参碱葡萄糖注射液中细菌内毒素

5.1 苦参碱葡萄糖注射液细菌内毒素检查法—动态浊度法

5.2 材料

5.2.1 细菌内毒素工作标准品

5.2.2 动态浊度法鲎试剂

5.2.3 细菌内毒素检查用水

5.2.4 苦参碱葡萄糖注射液

5.2.5 32 孔动态试管仪

5.3 方法与结果

5.3.1 仪器条件

5.3.2 细菌内毒素限值（L）的确定

5.3.3 标准曲线的制备及可靠性

5.3.4 样品溶液配制及干扰试验

5.3.5 苦参碱葡萄糖注射液热原检查结果

6 细菌内毒素检查法的影响因素及预防对策

6.1 试剂、试药的影响

6.1.1 鲎试剂

6.1.2 标准物质质量的稳定性

6.1.3 细菌内毒素检查用水

6.1.4 干扰试验用供试品

6.1.5 贮藏

6.2 试验器具的影响

6.2.1 试验器具选择

6.2.2 试验器具的处理

6.3 试验操作的影响

6.3.1 操作熟练程度

6.3.2 细菌内毒素国家标准品或工作标准品的复溶

6.3.3 鲎试剂的复溶

6.3.4 时间及温度的控制

6.4 PH 值的影响

6.4.1 细菌内毒素检测

6.4.2 干扰试验

6.4.3 结果分析

6.5 内毒素累加的影响

6.6 干扰凝集反应物质的影响

6.6.1 多糖

6.6.2 蛋白质

6.6.3 离子

6.7 试验环境的影响

6.8 小结

7 结论

致谢

参考文献

附录