靶向性腺病毒介导VEGF启动子驱动CD/TK双自杀基因系统混合超液态碘油综合治疗兔VX2肝移植癌的实验研究

摘要

目的： 评价采用腺病毒介导VEGF启动子驱动CD/TK双自杀基因系统(Ad-VEGFp-CDglyTK)混合超液态碘油，经肝动脉靶向性栓塞，术后腹腔注射更昔洛韦(GCV)+5-氟胞嘧啶(5-FC)，综合治疗兔VX2肝移植癌的效果。 材料与方法: 第一部分：腺病毒介导VEGF启动子驱动CD/TK双自杀基因系统的构建：采用pAdEsayVEGFp-CDglyTK重组质粒转染293细胞，进行包装、扩增；采用标准的氯化铯密度梯度离心法纯化；采用空斑试验测定滴度；通过荧光显微镜观察293细胞中绿色荧光蛋白(GFP)的表达观察重组病毒的包装与复制；采用DNA抽提、PCR、琼脂糖凝胶电泳法鉴定。 第二部分：兔VX2肝移植癌模型的建立：雄性新西兰大白兔，40只，采用开腹直视下组织块种植法，将VX2瘤株接种于兔肝左叶内，建立兔VX2肝移植癌动物模型；应用MRI、SCT、DSA、US等影像学手段监测。 第三部分：靶向性腺病毒介导VEGF启动子驱动CD/TK双自杀基因系统混合超液态碘油综合治疗兔VX2肝移植癌的实施与综合评价：当肿瘤达2.0cm直径时，将荷瘤兔随机分为NS组(仅注射生理盐水，对照)， LP组(仅注射超液态碘油)，Ad-VEGFp-CDglyTK组(注射Ad-VEGFp-CDglyTK)及Ad-VEGFp-CDglyTK+LP组(注射Ad-VEGFp-CDglyTK与超液态碘油)。利用微导管经肝动脉介入，将生理盐水；超液态碘油；Ad-VEGFp-CDglyTK；Ad-VEGFp-CDglyTK与超液态碘油分别给予不同组。 结论: 1．本实验成功地构建了腺病毒介导VEGF启动子驱动CD/TK双自杀基因系统(Ad-VEGFp-CDglyTK)。重组腺病毒的滴度达1×10<'12>pfu/ml。PCR检测发现腺病毒内有CD/TK双自杀基因DNA水平的表达。 2．本实验成功地建立兔VX2肝移植癌动物模型。该模型具有接种方法简单、成瘤率高、重复性好、模型性质稳定的特点，是可供介入实验的肝癌动物模型。 3．本实验成功地实施了靶向性腺病毒介导VEGF启动子驱动CD/TK双自杀基因系统混合超液态碘油综合治疗兔VX2肝移植癌。经肝动脉介导方式，是Ad-VEGFp-CDglyTK混合超液态碘油治疗兔VX2肝移植癌理想的给药方法及途径。 4．RT-PCR检测发现兔VX2肝移植癌动物肿瘤组织内有CD/TK双自杀基因mRNA水平的表达。 5．综合应用MRI、SCI、、DSA、US等影像学手段，可满意观察到肿瘤，其优点：①早期发现肿瘤形成；②动态观察肿瘤生长及转移情况等。综合影像评价有利于实验动物的筛选。 6．Ad-VEGFp-CDglyTK混合超液态碘油，经肝动脉靶向性栓塞，术后腹腔注射GCV+5-FC，对兔VX2肝移植癌有确切的杀伤作用。该综合治疗体系具有满意的体内抑瘤效应，表现为肿瘤的生长抑制、瘤体微血管密度的减少、肿瘤组织坏死及肿瘤细胞凋亡的增加等。 7．该综合治疗体系与单纯超液态碘油栓塞疗法以及单纯灌注Ad-VEGFp-CDglyTK、术后腹腔注射GCV+5-FC疗法相比较，对兔VX2肝移植癌有增强治疗效果的作用。 8．该综合治疗体系对兔VX2肝移植癌的治疗具有比较安全的优点。治疗后，荷瘤兔心、脑、肾、脾等器官无明显组织学变化，提示对荷瘤兔无明显系统毒副作用。 9．该综合治疗体系有望成为治疗人类肝癌一种新型、可行而有效的方法。

目录

缩略词表

前 言

第一部分腺病毒介导VEGF启动子驱动CD/TK双自杀基因系统的构建

第二部分兔VX2肝移植癌模型的建立

第三部分靶向性腺病毒介导VEGF启动子驱动CD/TK双自杀基因系统混合超液态碘油综合治疗兔VX2肝移植癌的实施与综合评价

技术路线

总 结

附 图

第一部分：腺病毒介导VEGF启动子驱动CD/TK双自杀基因系统的构建

第二部分：免VX2肝移植癌模型的建立

第三部分：靶向性重组腺病毒介导VEGF启动子驱动CD/TK融合双自杀基因系统混合超液态碘油综合治疗免VX2肝移植癌的实施

在校期间发表论文

综述自杀基因疗法的现状

致 谢