巨噬细胞移动抑制因子小干扰RNA对肝癌细胞表达血管内皮生长因子的抑制效应

摘要

目的:观察巨噬细胞移动抑制因子（MIF）小干扰RNA（siRNA）对肝癌细胞表达血管内皮生长因子（VEGF）的影响，并初步探讨MIF在肝癌新生血管生成中的作用。 方法:Western blot检测MIF、VEGF和p-MAPK在肝癌和癌旁组织的表达情况；人工化学合成MIF siRNA和对照siRNA，将其转染PLC、HepG2肝癌细胞株；定量PCR检测MIF和VEGF mRNA；Western blot检测MIF、VEGF和p-MAPK蛋白的表达。 结果:MIF、VEGF、p-MAPK蛋白和MIF、VEGF mRNA在肝癌组织中的表达明显较癌旁组织高。MIF蛋白在肝癌组织中的表达较癌旁组织高3．8±1．76倍；VEGF蛋白在肝癌组织中的表达较癌旁组织高2．89±0．39倍；p-MAPK蛋白在肝癌组织中的表达较癌旁组织高3．54±0．85倍。肝癌组织中MIF mRNA的表达较癌旁组织高5．57±1．21倍，肝癌组织中VEGF mRNA的表达较癌旁组织高4．42±1．30倍。 MIF siRNA以浓度50nMol/L和100nMol/L转染肝癌细胞株PLC和HepG2，并以对照siRNA转染PLC和HepG2做阴性对照。在50nMol/L MIF siRNA干预组中，PLC细胞MIF和VEGF mRNA的表达分别下调（78．8±7．2）％和（60．6±2．6）％：MIF和VEGF蛋白的表达分别下调（57．3±3．4）％和（52．6±12．9）％。HepG2细胞MIF和VEGF mRNA的表达分别下调（74．3±8．9）％和（65．6±4．6）％；MIF和VEGF蛋白的表达分别下调（54．8±6．8）％和（52．4±11．1）％。在siRNA处理的PLC和HepG2细胞中，MIF、VEGF mRNA和蛋白表达的下调值与对照siRNA组相比，差异有统计学意义。 在100nMol/L MIF siRNA干预组中，PLC细胞MIF和VEGF mRNA的表达分别下调（90．4±2．9）％和（79．8±1．2）％：MIF和VEGF蛋白的表达分别下调（78．7±1．2）％和（87．4±2．3）％。HepG2细胞MIF和VEGF mRNA的表达分别下调（88．4±4．6）％和（80．7±2．2）％；MIF和VEGF蛋白的表达分别下调（77．9±2．3）％和（68．5±2．8）％。在siRNA干预的PLC和HepG2细胞中，MIF、VEGF mRNA和蛋白表达的下调值与对照siRNA组相比，差异有显著的统计学意义。MIF siRNA50nMol/L干预组与100nMol/L干预组相比较，MIF、VEGF mRNA和蛋白在PLC和HepG2中的表达差异也有统计学意义。 MIF siRNA转染PLC和HepG2细胞24小时后，Western blot检测p-MAPK蛋白的表达，并以MAPK为参照。50nMol/L MIF siRNA干预组中，PLC和HepG2细胞p-MAPK蛋白的表达分别下调48．6％和45．7％，与对照siRNA组相比，差异有统计学意义；100nMol/L MIF siRNA干预组中，PLC和HepG2细胞p-MAPK蛋白的表达分别下调79．7％和64．2％，与对照siRNA组相比，差异有统计学意义。MIF siRNA50nMol/L干预组与100nMol/L干预组相比较，p-MAPK蛋白在PLC和HepG2中的表达差异有显著的统计学意义。 结论:肝癌组织中高表达MIF、VEGF mRNA和MIF、VEGF蛋白； MIFsiRNA能特异性阻断PLC及HepG2细胞MIF mRNA和蛋白的表达，并且同时有效下调VEGF mRNA和蛋白的表达；MIF可能通过ERK-MAPK信号通路调控VEGF基因和蛋白的表达，参与肿瘤血管的生成和促进肿瘤细胞的转移。

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