mtDNA(线粒体DNA)与原发性骨质疏松症关系及其氧化损伤机制的初步研究

摘要

目的：
　　1.从反映mtDNA“质变”、“量变”的缺失率、拷贝数着手，探讨原发性骨质疏松症与mtDNA的相关性。
　　2.对骨质疏松组与非骨质疏松组血清行8-OHdG浓度检测，探讨血清8-OHdG在两组患者中的变化情况，以进一步证明氧化损伤在骨质疏松症发生发展中的作用。
　　3.进一步探讨患者mtDNA缺失和拷贝数变化与8-OHdG的关系。
　　方法：
　　1.自2011年7月-2012年1月，作者从广州医学院第二附属医院、广州中医药大学附属骨伤科医院住院患者中严格按照纳入标准和排除标准随机选取患者58名，根据患者的病情需要行骨密度检测，并参照骨密度检查结果，分为骨质疏松组（实验组）40名与非骨质疏松组(对照组)18名；其中所有患者均行腰椎（L1-4）骨密度检测，而同时行左右股骨骨密度检测的患者45名（实验组27名，对照组18名）；上述58名患者中行腰椎手术19例，实验组10例，对照组9例；对上述58名患者、19例手术患者分别留存外周血、骨组织。
　　2.对58名患者的外周血、19例手术患者留存骨组织行普通 PCR定性检测4.9kb（4977bp）、3.7kb片段缺失，实时荧光定量PCR检测mtDNA拷贝数。另外对58名患者的外周血血清Elisa行血清8-OHdG检测。
　　3.统计学分析4.9kb（4977bp）及3.7kb片段缺失、拷贝数、8-OHdG三个指标之间的相关性及与其他相应参数的相关性；并对原发性骨质疏松症的独立危险因素进行评估。
　　结果：
　　1.本研究纳入的58名患者，其中实验组40名，对照组18名，两组患者在腰椎（L1-4）BMD、T值均有统计学差异（p<0.01）；其中45名患者（实验组27名，对照组18名）行左右股骨骨密度检测，两组患者在左右股骨BMD、T值亦均有统计学差异（p<0.01）；所有患者在年龄、身高、体重、BMI差异无统计学意义（p均>0.05）,而在性别上两组患者差异有统计学差异（p<0.05）。
　　2.所有患者外周血、19例腰椎手术患者骨组织中均未发现mtDNA4.9kb（4977bp）、3.7kb片段缺失。
　　3.采用2-ΔΔCT的计算法统计所有患者（58名）mtDNA拷贝数相对对照样本(选取对照组中一年龄较大且同时行腰椎手术的患者的血样本作为对照样本)的倍数；Spearman相关分析示19例腰椎手术外周血及骨组织mtDNA拷贝数具有很好的相关性(r=0.710,p=0.001)；Spearman相关分析示58名患者外周血 mtDNA拷贝数与腰椎（L1-4）BMD、T值呈负性相关（r=-0.341 p<0.01，r=-0.396 p<0.01）；其中同时行左右股骨骨密度检测的45名患者中，其外周血 mtDNA拷贝数与左、右股骨 BMD、T值也呈负性相关（r=-0.543 p<0.01、r=-0.532 p<0.01；r=-0.483 p<0.01、r=-0.449 p<0.01）；但本组患者中mtDNA拷贝数与年龄、BMI无明显相关性（p均>0.05）。
　　4. Spearman相关分析示58名患者外周血血清8-OHdG浓度与腰椎（L1-4）BMD、T值呈负性相关（r=-0.442 p<0.01，r=-0.439 p<0.01）；其中同时行左右股骨骨密度检测的45名患者中，其外周血血清8-OHdG浓度与左、右股骨BMD、T值也呈负性相关（r=-0.397 p<0.01，r=-0.458 p<0.01；r=-0.423 p<0.01,r=-0.455 p<0.01）；本组患者中外周血血清8-OHdG浓度与年龄、BMI无明显相关性(p>0.05)，与mtDNA拷贝数亦无明显相关性(p>0.05)。
　　5.多因素 Logistic回归分析结果在校正其他影响因素后，本实验回归模型中的性别（女性）、8-OHdG、mtDNA拷贝数为原发性骨质疏松症的独立危险因素，其中8-OHdG、mtDNA拷贝数OR分别为3.410（95％CI：1.011-11.504，P=0.048）、33.721（95%CI：2.926-388.600，p=0.005）。
　　结论：
　　1.mtDNA4.9kb（4977bp）、3.7kb片段缺失可能与中国人原发性骨质疏松症患病关系不大。
　　2.患者外周血mtDNA拷贝数与骨组织mtDNA拷贝数有显著相关性，这在一定程度上说明利用外周血mtDNA拷贝数来代替骨组织mtDNA拷贝数进行其变异的检测的可行性。
　　3.外周血mtDNA拷贝数与腰椎（L1-4）及左右股骨BMD、T值明显相关，这也证明了mtDNA可能参与原发性骨质疏松症的发病。
　　4.外周血血清8-OHdG浓度也与腰椎（L1-4）及左右股骨BMD、T值明显相关，这说明了氧化损伤机制在原发性骨质疏松症发病中的作用。
　　5.外周血血清8-OHdG浓度与 mtDNA拷贝数无明显相关性，这在一定程度上说明mtDNA氧化损伤可能不是原发性骨质疏松症发病的主要机制。
　　6.血清8-OHdG、外周血mtDNA拷贝数是原发性骨质疏松症的独立危险因素，对原发性骨质疏松症有一定的预测价值。

目录

封面

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缩略语中英文对照

中文摘要

英文摘要

前言

材料与方法

1.1 主要仪器试剂及仪器

1.2 方法

结果

讨论

结论

参考文献

综述

致谢

（附）知情同意书(2.0版2011年9月)

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