大麻受体激动剂WIN55,212-2对肝癌细胞HepG2、BEL-7402增殖和凋亡的影响

摘要

大麻类物质具有止痛、镇静、抗化疗引起的呕吐等多种药理作用，最近的研究表明其具有抗肿瘤的作用，在靶向治疗癌症方面很有前景。但大麻类物质在肝癌方面研究很少。本课题选择了一种人工合成的大麻受体激动剂WIN55,212-2(WIN)，拟研究其对肝癌细胞的影响。
　　目的:
　　1.观察激活大麻受体对肝癌细胞HepG2增殖的影响。
　　2.观察激活大麻受体对肝癌细胞HepG2凋亡的作用，并对其机制进行初步探讨。
　　3.观察激活大麻受体对肝癌细胞BEL-7402增殖的影响。
　　4.观察激活大麻受体对肝癌细胞BEL-7402凋亡的作用，并对其机制进行初步探讨。
　　方法：
　　1.肝癌细胞HepG2分成对照组、不同剂量WIN处理组，MTT法检测WIN对其增殖的影响。
　　2.肝癌细胞HepG2分成对照组、不同剂量WIN处理组，DNA梯度电泳法检测细胞凋亡DNA片段，检测WIN对其凋亡的影响。
　　3.肝癌细胞HepG2分成对照组、不同剂量WIN处理组，流式细胞术检测各组细胞凋亡率。
　　4.肝癌细胞HepG2分成对照组、不同剂量WIN处理组，Western blot检测各组细胞cleaved caspase-3和c-myc蛋白表达。
　　5.分光光度法检测WIN诱导后HepG2细胞的caspase-3、8、9的活性变化。
　　6.肝癌细胞BEL-7402分成对照组、不同剂量WIN处理组，MTT法检测WIN对其增殖的影响。
　　7. DAPI染色法检测WIN对BEL-7402细胞凋亡的影响。
　　8.肝癌细胞BEL-7402分成对照组、不同剂量WIN处理组，流式细胞术检测各组细胞凋亡率。
　　9.分光光度法检测WIN诱导后BEL-7402细胞的caspase-3、8、9的活性变化。
　　10.肝癌细胞BEL-7402分成对照组、不同剂量WIN处理组，荧光染料JC-1检测WIN诱导后细胞线粒体膜电位的变化。
　　结果：
　　1.大麻受体激动剂WIN能抑制肝癌细胞HepG2生长，上述效应具有剂量依赖性。
　　2. DNA梯度电泳法、流式细胞术检测显示大麻受体激动剂WIN能促进肝癌细胞HepG2凋亡。
　　3. Western Blot检测WIN诱导后HepG2细胞cleaved caspase-3、c-myc蛋白的表达结果显示：与对照组相比，用药组的cleaved caspase-3蛋白表达水平升高，c-myc蛋白表达水平下降。
　　4.检测HepG2细胞caspase-3、8、9的活性结果表明：在10μmol/L WIN作用24h内，caspase-3、8、9的活性先后都升高。
　　5.大麻受体激动剂WIN能抑制肝癌细胞BEL-7402生长，上述效应具有剂量依赖性。
　　6. DAPI染色、流式细胞术检测显示WIN能促进肝癌细胞BEL-7402凋亡。
　　7.检测BEL-7402细胞caspase-3、8、9的活性结果表明：在10μmol/L WIN作用24h内，caspase-3、8、9的活性先后都升高。
　　8.荧光染料JC-1检测WIN诱导后BEL-7402细胞线粒体膜电位的变化：与对照组相比，10μmol/LWIN剂量组、20μmol/L WIN剂量组的细胞线粒体膜电位下降，在24h内有时间依赖性。
　　结论：
　　大麻受体激动剂WIN能抑制肝癌细胞HepG2和BEL-7402生长，诱导肝癌细胞凋亡，并与cleaved caspases和c-myc的蛋白表达相关，线粒体在凋亡过程中可能起到重要作用。

目录

封面

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中英文对照词汇

中文摘要

英文摘要

前 言

材料和方法

一、实验材料

二、实验方法

结 果

第一部分 WIN对HepG2细胞增殖和凋亡的影响

1. HepG2 细胞中CB1、 CB2的表达水平较高

2. WIN对 HepG2 细胞增殖的影响

3. WIN诱导HepG2 细胞DNA片段检测

4. WIN诱导HepG2 细胞凋亡率检测

5. WIN对 HepG2 细胞 cleaved caspase-3 蛋白表达的影响

6. WIN对 HepG2 细胞caspase-3、8、9 活性影响

7. WIN显著减少HepG2细胞c-myc 的表达

第二部分 WIN对BEL-7402细胞增殖和凋亡的影响

1. WIN对 BEL-7402细胞增殖的影响

2. WIN干预 BEL-7402细胞DAPI染色结果

3. PI单染检测BEL-7402细胞凋亡率

4. Annexin Ⅴ-FITC/PI双染检测BEL-7402细胞早晚期凋亡率

5. WIN对BEL-7402细胞caspase-3、8、9 活性影响

6. JC-1探针检测BEL-7402细胞线粒体膜电位的变化

讨 论

结 论

展 望

参考文献

综 述

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