髓系细胞触发受体-1、血清淀粉样蛋白A和降钙素原在慢性阻塞性肺疾病急性加重中的应用

摘要

背景:
　　慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)是一种慢性呼吸系统疾病。
　　AECOPD可能与感染等因素导致COPD肺部和全身炎症过程进一步放大有关;引起AECOPD的病因不同,机体的炎症反应也可能存在差异。因此,从炎症介质和细胞因子中寻找AECOPD的生物标记,建立AECOPD早期诊断和分型分级标准,具有科学性和可行性。
　　髓系细胞触发受体-1(triggering receptor expressed on myeloid cell-1,TREM-1)、血清淀粉样蛋白A(serum amyloid A,SAA)和降钙素原(Procalcitionin,PCT)是新近较受关注的生物标志物,有研究显示三者在AECOPD早期诊断、病原学诊断上有重要价值。TREM-1和SAA可能为AECOPD的病情严重程度判断上提供客观依据。
　　TREM-1是新近发现的细胞膜受体,具有激发和放大炎症反应的作用,最初发现于脓毒血症,在炎症反应中发挥主导作用,是诊断感染性疾病的标志物。TREM-1属于免疫球蛋白超家族,在髓系细胞上表达。TREM-1通过特殊的细胞信号转导途径促进促炎介质的产生、抑制抗炎介质的表达而激活和放大炎症级联反应,从而放大感染所致的炎性反应信号。同时TREM-1能引起中性粒细胞脱颗粒、呼吸爆发和吞噬反应,延长炎症部位中性粒细胞和单核细胞的生存。研究表明,细菌和真菌感染可使痰液和血液的TREM-1的表达明显上调,但在非感染炎症性疾病以及由分枝结核杆菌引起的肉芽肿性炎症或异物肉芽肿中TREM-1却是低表达。Radsak的研究显示稳定期COPD患者的TREM-1较健康者显著增高。Rohde的新近研究发现痰病毒PCR阳性的AECOPD患者血清TREM-1的水平明显低于阴性的患者。TREM-1出现早,半衰期短,与体内感染同步,可作为感染性疾病诊断的新指标,在AECOPD的病因分型和分级中,可能具有非常重要的意义。
　　血清淀粉样蛋白A(serum amyloid A,SAA)是一个非常敏感的急性时相蛋白。是由同一簇基因编码的一组多形性蛋白,主要在肝细胞合成,但肝外器官也可产生,在正常组织中、动脉粥样硬化、阿尔茨海默病、炎症反应和肿瘤组织中可表达。当机体受到各种炎症因素刺激时,8h～12h内SAA即可达到峰值,反应快速,增高幅度可达正常值的1000倍;半衰期也极短,只有50min,因此机体炎症控制后,可迅速降至正常。这种特性使得SAA成为目前最敏感的炎症标志物之一,较血沉和白细胞升高更早、更灵敏可靠,动态监测SAA水平或许有助于判断病情的变化。Yamada的研究显示SAA在细菌和病毒感染时均升高,细菌感染时升高明显。Hutchinson的研究显示SAA在AECOPD患者病毒感染时升高。Bozinovski等报道在AECOPD中SAA升高,且其与严重度分级密切相关。SAA可能有助于AECOPD的早期识别、病因诊断和病情严重度分级评估。
　　降钙素原(Procalcitionin,PCT)是降钙素的前肽,由116个氨基酸组成,相对分子质量为13000,血清中半衰期约为25h～30h,生理状态下降钙素原由甲状腺c细胞产生,血清中含量极低。细菌感染和脓毒血症等情况下,降钙素原水平明显升高,但自身免疫性炎症或病毒感染时降钙素原水平升高并不明显。因此被认为是诊断细菌感染、预测其病情和预后的良好的生物标记。Stolz的研究结果提示,根据PCT水平指导AECOPD的抗生素治疗,可以安全地减少下呼吸道低浓度细菌感染患者的抗生素应用。Lacoma的研究提示PCT在肺炎及AECOPD患者中较稳定期COPD患者均升高。
　　感染是AECOPD的主要诱因,TREM-1、SAA和PCT与AECOPD、感染具有较强的相关性,通过研究TREM-1、SAA和PCT在AECOPD中的变化及其与病原学的相关性,在COPD的防治和机制研究中将有重要的意义和广泛的应用前景。
　　目的:
　　探讨髓系细胞触发受体-1(TREM-1)、血清淀粉样蛋白A(SAA)、降钙素原(PCT)在慢性阻塞性肺疾病急性加重期(AECOPD)的临床应用。
　　方法:
　　1.纳入对象2010年1月至2011年6月因COPD在门诊或住院部诊治的稳定期患者40例,GOLD(肺功能)分级:Ⅰ级5例,Ⅱ级16例,Ⅲ级13例,Ⅳ级6例。
　　2.纳入标准
　　患者年龄40～80岁,COPD诊断需符合慢性阻塞性肺疾病诊治指南(2007年修订版)诊断标准。所有患者前一年至少有1次AECOPD,处于稳定期即近4周无呼吸道感染及急性加重。
　　3.排除标准
　　(1)合并严重心脑血管疾病或严重躯体疾病(如心肌梗塞、不稳定型心绞痛、脑血管意外、恶性肿瘤、肾功能不全等)。
　　(2)除COPD外的长期慢性炎症疾病,如结缔组织病、既往诊断明确的哮喘和支气管扩张。
　　(3)本次调查后1周内发生AECOPD者。
　　(4)妊娠、哺乳期妇女。
　　(5)有慢性酗酒史、精神病史或滥用药物史或任何影响依从性的因素。
　　(6)不能留取血、痰或尿液标本者。
　　(7)无法完成肺功能检测者。
　　(8)正在参加其它药物试验者。
　　(9)其它情况无法完成实验者。
　　4.资料及标本收集
　　(1)记录患者的一般资料,吸烟状况、家族史、呼吸道症状(咳嗽、咳痰、喘息、气促和其它)、急性加重情况(呼吸道症状、用药和住院情况)、呼吸困难和症状评分和合并疾病等。
　　(2)对患者进行体格检查及X线胸片、心电图、肺通气功能+支气管舒张试验、外周血氧饱和度检查及血常规等常规检查,并留取静脉血标本待测。
　　(3)与患者保持电话联系密切随访,详细告知什么情况下为稳定期、急性加重,出现病情变化时及早到院诊治,进行体格检查及X线胸片、心电图、肺通气功能+支气管舒张试验、外周血氧饱和度检查及血常规等常规检查,并再次留取静脉血及痰液标本。痰液标本立即送检行病原学检查,所有静脉血标本经处理后均于-70℃冻存待测。
　　5.测定方法
　　TREM-1、SAA检测方法:均采用ELISA法,操作按试剂盒和相关说明书进行(TREM-1试剂盒为美国R&D System公司生产,SAA试剂盒为美国BIOSOURCE公司生产)。
　　PCT检测方法:采用酶联荧光分析法(ELFA法),使用法国梅里埃BioMerieux公司VIDAS全自动酶联荧光分析仪及配套试剂进行血清PCT全自动定量检测。
　　病原学检测:痰细菌培养:可用咳深部痰或诱导痰标本,涂片检查为合格痰标本后送检,采用法国生物梅里埃(BioMerieux)公司的VITEK2 Compact全自动微生物分析仪将分离菌株鉴定到种。病毒检测:采用痰标本,采用美国ABI公司的ABI7500荧光定量PCR仪运用聚合酶链反应技术(PCR)方法进行鉴定。
　　6.统计学分析
　　全部数据采用SPSS15.0统计软件处理。计量资料为正态分布时用x±s描述,两样本间比较用t检验,多样本间比较用方差分析;计量资料呈非正态分布,用中位数描述,采用非参数分析检验。计数资料采用χ2检验。P<0.05有统计学差异。
　　结果:
　　1、入选40例COPD患者中,男性患者37例,女性患者3例,平均年龄66.13±6.32岁。吸烟者34例,非吸烟者5例,戒烟者1例。既往有肺部手术史(炎症假瘤)者1例,高血压病史者4例,胃肠疾病史3例,骨关节疾病史2例。所有COPD患者稳定期胸片检查符合COPD表现,急性加重时胸片无肺实质渗出性炎症改变。心电图均为窦性心律,偶发室性早搏者2例,偶发房性早搏者3例,有完全或不完全性右束支传导阻滞者5例,T波轻度低平者2例。急性加重时有3例患者出现窦性心动过速,余患者心电图较稳定期无明显变化。
　　2、AECOPD患者血白细胞、中性粒细胞绝对值、血清TREM-1、SAA水平及血清PCT阳性率均较稳定期升高。
　　3、痰细菌培养结果阳性AECOPD患者血清TREM-1水平、PCT阳性率较阴性患者均升高,但SAA水平差异无统计学意义。痰病毒PCR结果阳性AECOPD患者血清SAA水平较阴性患者升高,但TREM-1水平、PCT阳性率差异无统计学意义。
　　4、将AECOPD患者按Anthonisen标准分为Ⅰ～Ⅲ型共三组,运用非参数秩和检验对比各组间TREM-1、SAA水平,差异无统计学意义。
　　结论:
　　1、SAA、PCT可作为早期判断AECOPD的客观指标。
　　2、AECOPD患者中如其TREM-1水平升高、PCT阳性提示急性加重的诱因可能与下呼吸道细菌感染有关。
　　3、AECOPD患者中如其SAA水平升高、TREM-1不高、PCT阴性提示急性加重的诱因可能与下呼吸道病毒感染有关。

目录

封面

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中文摘要

英文摘要

中英文缩略词语表

第一章 前 言

第二章 材料与方法

一、 研究对象

二、试剂

三、主要仪器

四、标本检测

五、统计方法

第三章 结 果

（一）、患者一般资料

（二）COPD患者稳定期、急性加重期血清TREM-1、SAA水平、PCT阳性率的比较

（三）、COPD 患者稳定期、急性加重期血白细胞、中性粒细胞绝对值比较

（四）、痰细菌培养结果

（五）、痰病毒PCR结果

六）、（ AECOPD 患者痰细菌培养阳性组及痰细菌培养阴性组血清TREM-1、SAA水平及PCT阳性率比较

七）、评价TREM-1、SAA在AECOPD患者病情严重度评估中的价值（

第四章 讨 论

第五章 结 论

第六章 展 望

参考文献

综述

附录

附图

致谢

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