木本曼陀罗毛状根诱导及其植株再生

摘要

本文对木本曼陀罗毛状根诱导及其植株再生进行了研究。文章通过高效液相色谱法检测木本曼陀罗毛状根及其再生植株中的生物碱含量，结果显示：毛状根中莨菪碱和东莨菪碱含量相对于野生植株的根和叶中的含量有了很大的提高。此结果有力地证明了通过发根农杆菌的遗传转化技术可以获取高产莨菪烷类生物碱的木本曼陀罗毛状根，具有非常重要的研究意义和商业价值。将毛状根转入附加不同激素的培养基中诱导再生植株，并检测其中所含莨菪碱和东莨菪碱的含量。木本曼陀罗毛状根采用“一步法”诱导芽的适宜培养基为：MS+6-BA2.0 mg/L+NAA0.2 mg/L。“两步法”诱导芽的适宜条件为：MS+6-BA4.0 mg/L+KT0.5 mg/L+2,4-D0.5mg/L为适宜毛状根的愈伤诱导培养基，芽诱导培养基为MS+6-BA4.0 mg/L+NAA0.2 mg/L。最适宜生根培养基为1/2MS+IBA0.1 mg/L。HPLCI检测结果表明毛状根再生植株中莨菪烷类生物碱的含量较野生植株有了很大的提高。

目录

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第1章文献综述

1.1植物次生代谢产物

1.2植物遗传转化

1.2.1发根农杆菌和Ri质粒

1.2.2发根农杆菌诱导毛状根形成的机制

1.3毛状根的研究方向和应用

1.3.1生产次生代谢产物

1.3.2毛状根的扩大培养

1.3.3毛状根植株再生及其应用

1.3.4毛状根遗传转化的应用

1.4莨菪烷类药物的药理作用及其应用

1.4.1莨菪烷类药物的药理作用

1.4.2莨菪烷类药物应用适应症

1.5莨菪烷类生物碱及木本曼陀罗的研究进展

1.5.1莨菪烷类生物碱的研究进展

1.5.2木本曼陀罗研究进展

第2章引言

第3章木本曼陀罗离体培养体系的建立

3.1材料与试剂

3.2实验方法

3.2.1外植体消毒

3.2.2丛生芽诱导

3.2.3不定芽生长及生根培养

3.2.4抗生素Cef浓度的筛选

3.3结果与分析

3.3.1升汞消毒时间的筛选

3.3.2不同激素配比对丛生芽分化的影响

3.3.3不同激素配比对不定芽生长及生根的影响

3.3.4抗生素Cef浓度的筛选

3.4讨论

第4章木本曼陀罗遗传转化体系的建立

4.1材料与试剂

4.2实验方法

4.2.1农杆菌的活化

4.2.2木本曼陀罗遗传转化条件的优化

4.2.3毛状根的离体培养及优良单克隆的选择

4.2.4毛状根的PCR检测

4.3结果与分析

4.3.1木本曼陀罗遗传转化条件的优化

4.3.2毛状根的离体培养及优良单克隆的选择

4.3.3毛状根的PCR检测

4.4讨论

第5章莨菪碱和东莨菪碱的提取及含量测定

5.1材料与试剂

5.2实验方法

5.2.1莨菪碱和东莨菪碱的提取

5.2.2莨菪碱和东莨菪碱的含量测定

5.3结果与分析

5.3.1莨菪碱，东莨菪碱标准品的HPLC标准曲线

5.3.2莨菪碱、东莨菪碱标准品和样品的HPLC色谱图

5.3.3不同毛状根系的生物量及莨菪碱和东莨菪碱含量

5.4讨论

第6章木本曼陀罗毛状根植株再生体系的建立

6.1材料与试剂

6.2实验方法

6.2.1毛状根不定芽的诱导

6.2.2不定芽抗性筛选及生根培养

6.2.3再生植株的PCR检测

6.2.4再生植株的莨菪碱和东莨菪碱含量检测

6.2.5再生植株的移栽

6.3结果与分析

6.3.1毛状根不定芽的诱导

6.3.2不定芽抗性筛选及生根培养

6.3.3再生植株的PCR检测

6.3.4再生植株的莨菪碱和东莨菪碱含量检测

6.3.5再生植株的移栽

6.4讨论

结论

参考文献

附录 缩写词表

致谢

在学期间所发表的文章