发根农杆菌转化怀地黄诱导毛状根及其再生植株

摘要

利用发根农杆菌15834菌株感染怀地黄组培苗子叶、叶柄和茎切段，建立了自效的毛状根培养及其植株再生体系。毛状根可直接从受伤的外植体产生，能在无外源激素的1/2MS固体和液体培养基上自主生长，表现出典型的发根特征。用100 μ ml/L 乙酰丁香酮处理对数生长期的农杆菌菌液感染子叶获得了46.7％的最高转化频率;在附加0.2mg/L KT和3.0mg/L 6-BA的1/2MS培养基上，毛状根能100％形成愈伤组织，51.49％分化出芽;分化芽在1/2MS培养基上100％生根,形成具有矮化、节间短和根系发达等特征的转化再生植株且移栽后生长旺盛;1个转化毛状根克隆的梓醇含量为0.557mg/g，是鲜地黄梓醇含量的48.5％，是生地鲜重梓醇含量的18％。ro1B基因PCR、Southern blot分析、冠瘿碱纸电泳和RT-PCR扩增检测证明农杆菌Ri质粒上的T-DNA整合到怀地黄基因组中并表达。