醋酸甲羟孕酮—聚乳酸原位凝胶植入剂的制备及对大小鼠的抗生育作用

摘要

醋酸甲羟孕酮是一种孕激素,它是孕酮的衍生物,主要通过直接作用于动物的下丘脑-垂体-卵巢性腺轴,从而抑制动物的卵泡发育及排卵。醋酸甲羟孕酮进入动物体血液,并储存在动物的脂肪组织中,子宫内膜首先受其影响,出现分泌期改变,待孕酮水平降低、子宫出血后,子宫内膜又受到从脂肪组织中缓慢释放的醋酸甲羟孕酮影响,出现增殖期改变,持续增加避孕效果。以可生物降解的聚合物聚乳酸polylactic acid(PLA)为载体制成的原位凝胶植入剂能以几乎恒定的速率释放药物,避免了由口服或注射给药所发生的血药浓度的波动所致的不良反应。而且又具有给药后载体自行降解,无需手术取出的优点。
　　目前有关避孕药制剂种类主要有口服片剂,注射避孕针,皮下埋植剂和透皮贴剂等,但国内未见原位凝胶缓释制剂的研制和相关文献报道。
　　本实验制成的注射型醋酸甲羟孕酮-聚乳酸原位凝胶植入剂是一种新型的长效避孕剂,它的缓释递药系统有利于减少服药次数,延长半衰期,增加稳定性,提高动物的依从性。本实验将其在大小鼠的抗生育作用上进行了研究,结果显示醋酸甲羟孕酮.聚乳酸原位凝胶植入剂能显著延长避孕时间,具有长效抗生育作用。实验表明,醋酸甲羟孕酮-聚乳酸原位凝胶植入剂可以作为一个新型的动物避孕药进行进一步研究。
　　目的:
　　1.制备醋酸甲羟孕酮-聚乳酸原位凝胶植入剂(MPA-PLA)并建立制剂的体外释放模型;建立醋酸甲羟孕酮原位凝胶植入剂体外释放含量的HLPC测定方法,并进行方法学研究。
　　2.观察醋酸甲羟孕酮-聚乳酸原位凝胶植入剂(MPA-PLA)对健康能繁大鼠血清中雌二醇(E2)和促黄体生成素(LH)浓度水平的变化。
　　3.探讨醋酸甲羟孕酮-聚乳酸原位凝胶植入剂(MPA-PLA)对健康雌性小鼠抗生育作用的影响。
　　方法:
　　1.通过处方优化筛选合理的处方制备了醋酸甲羟孕酮-聚乳酸原位凝胶植入剂(MPA-PLA),并用高效液相法进行了体外释放实验评价缓释效果;采用高效液相色谱法,测定条件为:色谱柱:VP-ODS;流动相:甲醇:水=70:30;流速:1mL·min-1;柱温:40℃;检测波长:254nm。
　　2.选取SD健康能繁大鼠35只,随机分成7组,每组5只。第1组为空白组,肌注PLA10mg·kg-1,第2~4组动物,以MPA含量计,分别按5 mg·kg-1、10 mg·kg-1、20mg·kg-1剂量肌内注射MPA-乙醇溶液,单次给药;第5~7组动物,以MPA含量计,分别按5 mg·kg-1、10 mg·kg-1、20 mg·kg-1剂量肌内注射MPA-PLA,单次给药。采用放射免疫法检测7组大鼠血清中LH、E2浓度水平的变化。
　　3.选取健康雌性小鼠70只,体重27g~30g,随机分为7组,每组10只。第1组为空白组,肌注PLA10mg·kg-1,第2~4组动物,以MPA含量计,分别按5 mg·kg-1、10 mg·kg-1、20mg·kg-1剂量肌内注射MPA-乙醇溶液,单次给药;第5~7组动物,以MPA含量计,分别按5 mg·kg-1、10 mg·kg-1、20 mg·kg-1剂量肌内注射MPA-PLA,单次给药。记录下各组生育时间及繁殖率。
　　结果:
　　1.建立的测定制剂中醋酸甲羟孕酮-聚乳酸原位凝胶植入剂含量的HPLC方法在1.0ug·mL-1~500.0ug·mL-1范围内,线性关系良好;该法日内RSD为1.60％,日间RSD为1.33％;在室温下MPA-PLA24h内具有良好的稳定性,平均回收率为98.3％,RSD为0.51％。通过优化配方和工艺制备的醋酸甲羟孕酮-聚乳酸原位凝胶植入剂MPA-PLA,用HPLC法测定醋酸甲羟孕酮的体外释出浓度证明,MPA-PLA可有效缓解醋酸甲羟孕酮在体外的释出速率,其持续释药达40d以上。
　　2.MPA-PLA肌注给药5mg·kg-1、10mg·kg-1、20 mg·kg-1剂量组的性激素浓度都比空白组少,15d时20 mg·kg-1高剂量组减少显著,说明MPA对大鼠具有抗生育作用,且随着MPA剂量的增加作用更加明显。MPA给药15d时,LH和E2水平下降,血清LH水平则随着给药剂量增加而降低,LH水平与MPA给药剂量的增加呈负相关;给药30d时,血清LH也随剂量的增加而持续降低。
　　3.MPA-PLA可以显著延长试验小鼠的不育期,降低试验小鼠产仔率和窝产仔数,其维持能繁小鼠的不育时间可长达40余天,降低试验小鼠产仔数量达50％。取得了极好的避孕效果。
　　结论:
　　1.通过处方筛选所制备的MPA-PLA体外试验具有明显的药物缓慢释放模式。结果表明该制剂达到了设计的要求,可以使MPA在以PLA为载体的原位凝胶植入剂的制剂中起到缓释长效的作用。
　　2.MPA-PLA能显著抑制大鼠血清中的E2和LH的浓度。
　　3.本研究制备的MPA-PLA能够延长小鼠的生育时间和抑制繁殖率,具有较好的抗生育作用。

目录

摘要

ABSTRACT

第1章 文献综述

1.1 甾体激素避孕药的研究进展

1.1.1 甾体激素避孕药的分类

1.1.2 甾体激素避孕药的作用及其机制

1.1.3 孕激素类避孕药醋酸甲羟孕酮(MPA)的作用机理

1.2 注射型原位凝胶植入剂的研究

1.2.1 热塑性糊剂(Thermoplastic pastes,TP)

1.2.2 原位交联聚合物系统(in situ cross-linked polymer systems)

1.2.3 原位沉淀凝胶(in situ Polymer Precipitation,ISPP)

1.2.4 热诱导凝胶系统

1.2.5 原位固化有机凝胶(in situ Solidifying Organogels)

1.2.6 疏水性脂肪酸(Hydrophobic Fatty-Acid)

1.3 避孕剂对动物抗生育的作用与意义

1.4 展望

第2章 前言

2.1 研究目的和意义

2.2 试验主要内容

2.2.1 考察注射型醋酸甲羟孕酮-聚乳酸原位凝胶植入剂体外释放的影响因素

2.2.2 设计醋酸甲羟孕酮-聚乳酸原位凝胶植入剂的处方工艺

2.2.3 醋酸甲羟孕酮-聚乳酸原位凝胶植入剂体外释放评价的研究

2.2.4 优化醋酸甲羟孕酮-聚乳酸原位凝胶植入剂的处方工艺

2.2.5 对健康能繁大鼠抗生育作用的影响

2.2.6 对健康雌性小鼠抗生育作用的影响

2.3 技术路线

第3章 醋酸甲羟孕酮-聚乳酸原位凝胶植入剂(MPA-PLA)的制备及体外药物释放评价

3.1 材料与方法

3.1.1 材料

3.1.2 方法

3.2 结果

3.2.1 MPA色谱图

3.2.2 标准曲线

3.2.3 线性关系

3.2.4 MPA-PLA体外累积释放率实验

3.2.5 正交实验设计筛选MPA-PLA处方

3.3 讨论

第4章 MPA-PLA对健康能繁大鼠血清中E2和LH浓度动态变化的影响

4.1 材料与方法

4.1.1 材料

4.1.2 方法

4.2 结果

4.2.1 大鼠血清中雌二醇(E_2)浓度的动态变化

4.2.2 大鼠血清中人促黄体生成激素(LH)浓度含量

4.3 讨论

第5章 MPA-PLA对健康雌性小鼠的抗生育作用

5.1 材料和方法

5.1.1 材料

5.1.2 方法

5.2 结果

5.2.1 对小鼠的生育时间的影响

5.2.2 对小鼠繁殖率的影响

5.3 讨论

第6章 全文结论

参考文献

附录

致谢

攻读学位期间发表论文