石蒜生物碱的高速逆流色谱制备、含量动态变化及合成途径关键酶PAL基因核心片段克隆的研究

摘要

石蒜不仅是观赏花卉，而且是重要的药用植物，在我国广泛分布，石蒜的鳞茎中含有多种生物碱，其中加兰他敏作为一种特定的、竞争性的、可逆的乙酞胆碱酯酶抑制剂，对于治疗阿尔茨海默氏痴呆症的中轻度认知障碍效果显著；石蒜碱具有镇静、镇痛解热作用和抗癌作用；伪石蒜碱、石蒜多糖、石蒜凝集素等也都已经被证实分别有抗肿瘤、降压、降血糖、抗病毒等作用。因此对石蒜生物碱的分离纯化及生物技术方面的研究将有利于石蒜的深度开发与利用 本文以忽地笑(L．aurea)(黄花石蒜)和石蒜(L．radiata)(红花石蒜)为原料，主要研究了石蒜生物碱的分离纯化、含量动态变化和PAL基因片段的克隆，具体内容如下： 1．石蒜碱、加兰他敏的分离纯化 目前，尚未见利用高速逆流色谱对石蒜提取物进行精制的报道，本项研究以黄花石蒜鳞茎为原料，以85％的乙醇为提取液进行提取，经有机溶剂处理得到石蒜碱纯度17.04％，加兰他敏纯度1.73％的浸膏，利用高速逆流色谱进行精制，采用的溶剂系统为氯仿：甲醇：水(0.001mol/L三乙胺)=4：3：1.5，经一次分离由含17.04％石蒜碱和1.73％加兰他敏的浸膏中制备得到纯度分别为97.36％和98_35％的石蒜碱单体和加兰他敏单体，回收率分别为77.34％和86.70％．实现了利用高速逆流色谱对石蒜碱粗品进行快速、高效的精制。 2．石蒜生物碱含量动态变化研究 为了了解石蒜生物碱含量的动态变化，以利于生产上的适时采收，本研究以黄花石蒜和红花石蒜为原料，于2008年9月份分别采集根、茎、叶、花、花苔，于2008年2、4、6、8、10、12月采集鳞茎，用HPLC测定二氢石蒜碱、石蒜碱、加兰他敏的含量进行，结果表明：在黄花石蒜和红花石蒜中，三种生物碱均主要集中在鳞茎中，根、茎、叶、花、花苔中含量较少．在黄花石蒜鳞茎中二氢石蒜碱的含量8月份最高，为0.0158％，12月份最低，全年平均含量为0.0115％；石蒜碱的含量也是8月份最高，为0.2213％，12月份最低，全年平均含量为0.1827％；加兰他敏的含量6月份最高，为0.0371％，2月份最低，全年平均含量为0.0260％。在红花行蒜鳞茎中二氢石蒜碱的含量为12月份最高，为0.0121％，6月份最低，全年平均含量为0.0105％；石蒜碱的含量8月份最高，为0.1141％，2月份最低，全年平均含量为0.0895％；加兰他敏的含量也是8月份最高，为0.0473％，2月份最低，全年平均含量为0.0337％。 3．PAL基因核心片段的克隆 以黄花石蒜嫩叶为原料，采用RACE方法对黄花石蒜中PAL进行克隆，从嫩叶中首次克隆了黄花石蒜中PAL基因的核心片段，长度为1183bp。

目录

文摘

英文文摘

声明

第一章文献综述

1.1石蒜属植物概述

1.2生物碱提取分离纯化研究进展

1.3石蒜生物碱药理研究概况

1.4生物碱次生代谢途径及关键酶基因研究进展

1.5本课题的研究意义及技术路线

第二章高速逆流色谱分离石蒜鳞茎中石蒜碱和加兰他敏的研究

2.1石蒜碱、加兰他敏检测方法的建立

2.2高速逆流分离石蒜碱、加兰他敏的研究

2.3小结

第三章石蒜生物碱的分布和含量的动态变化研究

3.1材料与仪器

3.2实验方法

3.3结果与分析

第四章石蒜生物碱合成途径中苯丙氨酸解氨酶基因核心片断克隆研究

4.1实验材料

4.2方法与步骤

4.3目的条带回收、亚克隆及测序

4.4结果与讨论

参考文献

致 谢

攻读硕士学位期间发表的学术论文和参加的科研课题