脂肪乳剂致动物骨质疏松及复方丹参的防治作用观察

摘要

目的：①研究用长期脂肪乳剂灌胃的方法建立大鼠、小鼠高脂血症动物模型；②探讨长期脂肪乳剂灌胃可否造成大鼠、小鼠高脂血症性骨质疏松，并探讨该类型骨质疏松的骨形态计量学和骨代谢、骨生物力学的改变，为骨质疏松病因学研究及防治研究提供新的思路；③探讨长期脂肪乳剂灌胃造成大鼠、小鼠的高脂血症可否诱发非酒精性脂肪肝病，观察其肝脏病理学改变；④探讨复方丹参合剂(DSC)对长期脂肪乳剂灌胃造成的大鼠、小鼠高脂血症及骨质疏松、非酒精性脂肪肝病是否有防治作用。 方法：通过长期给予大鼠、小鼠脂肪乳剂灌胃，观察实验动物是否可以发生高脂血症、骨质疏松和非酒精性脂肪肝病，方法如下： 实验一：长期给予大鼠脂肪乳剂灌胃实验取清洁级3m龄未交配SD大鼠27只(雌雄不拘，体重220±28g)，随机分成3组，每组9只，1组为普通饲料对照组(普通饲料喂养，蒸馏水5ml/kg/d灌胃共20周)，2组为脂肪乳剂组(脂肪乳剂5ml/kg/d灌胃连续20周)，3组DSC组(上午脂肪乳剂灌胃5ml/kg/d，下午予DSC5.0g生药/kg/d灌胃，连续20周)。 所有大鼠实验结束前第14d、13d和第4d、3d分别皮下注射盐酸四环素和钙黄绿素。实验结束时剪鼠尾采末梢血测血糖(BG)，大鼠心脏取血处死，分离血清测定谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)活力及总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白—胆固醇(HDL-c)含量；分离右侧胫骨作不脱钙硬组织切片，测量骨组织形态计量学静态和动态参数；肝组织称重，石蜡包埋制片进行组织学观察及病理改变评分。 实验二：长期给予小鼠脂肪乳剂灌胃实验清洁级2m龄KM小鼠50只(雌雄各半，体重20±2g)，随机分成5组，每组10只，1组为普通饲料对照组(普通饲料喂养，蒸馏水10ml/kg/d灌胃，连续8周)，2组为脂肪乳剂组(脂肪乳剂10ml/kg/d灌胃，共8周)，3组为辛伐他汀组(上午脂肪乳剂10ml/kg/d灌胃连续8周，最后4周下午予辛伐他汀1.5mg/kg/d灌胃)，4组复方丹参低剂量(DSC-L)组(上午脂肪乳剂10ml/kg/d灌胃连续8周，最后4周下午予DSC5.0g生药/kg/d灌胃)，5组复方丹参高剂量(DSC-H)组(上午脂肪乳剂10ml/kg/d灌胃，连续8周，最后4周下午予DSC10.0g生药/kg/d灌胃)。 实验结束时，所有小剪鼠尾采末梢血测BG，经眼球摘除取血处死，收集血液，离心分离血清，测定血清TC、TG和HDL-c含量；左侧股骨用于骨羟脯氨酸、钙、磷的测定；右侧股骨用于骨生物力学测定；肝脏称重，肝组织部分作匀浆测定肝脏脂质(TC和TG)，部分石蜡包埋制片进行组织学观察。 结果：1.长期脂肪乳剂灌胃对动物血糖、血脂、骨骼和肝脏的影响(1)长期脂肪乳剂灌胃可致大鼠、小鼠高脂血症： 与普通饲料组相比，脂肪乳剂组大鼠BG升高(P＜0.01)，小鼠BG不高，大、小鼠的TC、LDL-c和动脉粥样硬化指数(AI)均明显升高(P＜0.01)，HDL-c降低(P＜0.01)，TG无明显差异。 (2)长期脂肪乳剂灌胃可致大鼠、小鼠骨质疏松：①对大鼠骨形态计量学的影响：脂肪乳剂组与普通饲料组比较，松质骨静态参数骨小梁面积百分数(％Tb.Ar)、骨小梁数量(Tb.N)、骨小梁厚度(Tb.Th)分别降低63.4％、43.9％和32.7％(P＜0.01)，骨小梁分离度(Tb.Sp)增加111.0％(P＜0.01)，单位骨小梁面积破骨细胞数(Oc.N/BV)降低44.3％(P＜0.01)；动态参数荧光周长百分率(％L.Pm)、骨形成率(BFR/BS、BFR/TV)分别降低了45.8％、54.9％和65.4％(P＜0.05)；骨髓腔内白骨髓面积百分数明显增加(P＜0.01)，其中脂肪组织所占比例显著增加(P＜0.01)，血窦组织减少(P＜0.05)。 ②对小鼠骨代谢指标及生物力学的影响：脂肪乳剂组小鼠骨羟脯氨酸(Hyp)比值、骨Ca含量均明显下降(P＜0.01)，三点弯曲实验最大载荷、最大挠度和断裂载荷降低(P＜0.05)。 (3)长期脂肪乳剂灌胃可致大鼠、小鼠非酒精性脂肪肝病：与普通饲料组比较，脂肪乳剂组大鼠肝湿重和肝指数升高(P＜0.01)，血清ALT、AST明显升高(P＜0.01)，肝脏切片出现肝细胞脂肪变、水样变及坏死和炎症细胞浸润等病理表现；脂肪乳剂组小鼠肝湿重及肝指数均无统计学差异(P＜0.05)，肝脏切片出现少量肝细胞脂肪变和水样变，肝脏TC、TG均明显升高(P＜0.01)。 2.DSC对动物血糖、血脂、骨骼、肝脏的影响(1)DSC对长期脂肪乳剂灌胃造成的大鼠、小鼠高脂血症有防治作用：与脂肪乳剂组比较，大鼠DSC组BG降低(P＜0.01)，大鼠、小鼠AI均降低(P＜0.01)，但还没达到正常组的水平，HDL-c明显升高(P＜0.01)，小鼠DSC低、高剂量组间比较无统计学差异。 (2)DSC能预防长期脂肪乳剂灌胃造成的大、小鼠骨质疏松：①对大鼠骨形态计量学的影响：DSC组静态学参数％Tb.Ar、Tb.N、Tb.Th分别增加33.7％、61.5％和36.1％(P＜0.01)，Tb.Sp降低47.6％(P＜0.01)，Oc.N/BV无统计学差异，动态参数骨形成参数％L.Pm有增加趋势，BFR/BS增加了28.1％(P＜0.05)，但没达到普通饲料组水平；DSC组的红骨髓比例有所增加(P＜0.01)，但骨髓腔内仍然主要是白骨髓，其脂肪组织面积百分数减少(P＜0.01)，血窦组织面积百分数增加(P＜0.05)。 ②对小鼠骨代谢指标及生物力学的影响：DSC低、高剂量组骨Hyp比值、骨有机质比值均上升(P＜0.05)，与普通饲料组水平接近，但两治疗组间无差异；DSC高剂量组断裂载荷升高(P＜0.05)，但与普通饲料组仍有较大差异。 (3)DSC对长期脂肪乳剂灌胃造成的大鼠、小鼠非酒精性脂肪肝病有防治作用：与脂肪乳剂组比较，DSC组大鼠湿重和肝指数、ALT、AST降低(P＜0.05)，但还没达到普通饲料组水平，肝脏切片显示肝细胞脂肪变、水样变及坏死和炎症细胞浸润等病理表现均有所减轻；DSC组小鼠肝脏TC、TG均下降(P＜0.05)，但仍比普通饲料组高。 结论：1.本研究采用的脂肪乳剂长期灌胃可引起大鼠、小鼠出现TC升高、HDL-c降低为特征的脂质代谢紊乱，这种高脂血症与人类Ⅱa型高脂血症相似。 2.本研究采用的脂肪乳剂长期灌胃可致大鼠、小鼠出现高脂血症性骨质疏松症；这种骨质疏松症为低转换型，具有骨髓腔脂肪组织增加，破骨细胞数减少及骨形成率减少等特征。 3.长期脂肪乳剂灌胃可引起大鼠、小鼠非酒精性脂肪肝病，实验大鼠脂肪乳剂灌胃时间较长(5个月)，诱发出非酒精性脂肪肝炎，其特点是肝细胞出现脂肪变、气球变等病理改变；实验小鼠脂肪乳剂灌胃时间较短(2个月)，诱发出非酒精性脂肪肝，其特点是少量肝细胞脂肪变性，未出现明显气球变、炎症等病理改变，提示了随灌胃时间延长，非酒精性脂肪肝可向非酒精性脂肪肝炎发展。4.复方丹参合剂可提高长期脂肪乳剂灌胃的大鼠、小鼠血清HDL-c，对高脂血症所致骨质疏松有预防作用，还对长期脂肪乳剂灌胃引起的非酒精性脂肪肝病有一定的防治作用。

目录

学位论文独创性声明及学位论文知识产权声明

1前言

2材料与方法

3结果

4讨论

5结论

参考文献

文献综述

综述参考文献

致谢

附录