川渝地区HP-PRRS分子流行病学调查及自然病例猪血清IL-1和TNF-α含量测定

摘要

猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS)是由PRRSV(PRRS virus，PRRSV)引起的以怀孕母猪流产、早产和死胎等繁殖障碍及仔猪呼吸道症状等为主要征候群的高度接触传染性疾病。2006年下半年以来，高致病力猪繁殖与呼吸综合征(highpathogenic PRRS，HP-PRRS)自江西首次爆发以来，已在全国流行，给我国养猪业造成巨大经济损失。研究证实，我国分离的HP-PRRSV属于美洲型变异株，其Nsp2基因出现部分缺失。 采用RT-PCR方法，对重庆及周边地区自然病例的检测工作，以了解PRRS的周期性流行规律。通过调查，我们发现，重庆及周边地区于2006年12月传入HP-PRRS，2007年5月后出现流行高峰，6月中旬开始应用HP-PRRSV灭活苗后，年底该病流行有所遏制。本文对2008年1月以来的HP-PRRS自然病例进行了更加深入的研究，取得了如下结果： 1、2008年1月剑2009年1月一年中，重庆市的巴南、荣昌、大足、璧山、长寿、铜梁、渝北、合川、开县等和四川省的泸县、自贡、内江、宜宾、渠县、犍为、西昌、大竹、大英、邻水县共计19个区(市、县)31个猪场发生了‘无名高热’病，临床症状及病变均与HP—PRRS相似，采集的238份血清、肺、脾、淋巴结等病料，RT-PCR检测Nsp2部分序列，HP-PRRSV阳性134份，阳性率为56.3％。其中，四川省样品HP-PRRSV阳性率为54.9％。重庆市样品HP—PRRSV阳性率为59.6％。随机选择QX，YB，RC，QW和LS共计5份样品的RT-PCR产物，克隆后在上海生工测序，结果是，QX，YB，RC，LS序列完全相同，与JXA1株同源性为96％，OW与JXA1株同源性为98％。 2、鉴于HP-PRRS防控中仍然有较大规模的发病，为降低死亡率，减少因病造成的经济损失，我们期望寻找到更加有效的治疗和紧急防治措施，我们探索了自然病例持续体温高的原因。查阅资料发现，促致炎因子IL-1和TNF-α与体温升高有密切关系。为此，我们在4个发病猪场采集病猪(含2头濒死猪)血清73头份，RT-PCR检测出HP-PRRSV阳性42份。从中随机选20头病猪进行体温与血清IL-1和TNF-α含量相关性分析测定。结果是，血清中TNF-α含量在发病猪与健康对照猪之间无显著差异，与体温升高无关，血清中IL-1含量在病猪组显著高于健康对照组，但与体温升高的相关性不能明确。HP-PRRSV感染的病猪血清中IL-1和TNF-α以100 pg/mL为标准，大于者分别为14份(占70％)和5份(占25％)，低于者6份(占30％)和15份(75％)。2份濒死猪血清IL-1和TNF-α含量均很低，小于20pg/mL。采自3个无发病猪场的外观健康猪41份血清，HP—PRRSV RT—PCR检测阳性7份(占17％)，阴性34份(占83％)，IL-1和TNF-α含量以100 pg/mL为标准，大于者分别为9份(占21.95％)和10份(占24.39％)，低于者32份(占78.05％)和31份(75.61％)。健康猪群中HP—PRRSV阳性的7份血清样品中IL-1和TNF-α含量以100pg/mL为标准，大于者分别为2份(占21.95％)和1份(占24.39％)，低于者5份(占78.05％)和1份(75.61％)。无论是病猪还是健康猪，综合分析，IL-1在病猪、隐性感染和健康猪血清中含量分别为271.9±53.4pg/mL、46.74±19.1pg/mL和75.4±24.0pg/mL；TNF-α在病猪、隐性感染和健康猪血清中含量分别为74.3±23.2pg/mL、52.4±29.5pg/mL和77.3±13.4pg/mL。方差分析表明，血清IL-1含量，病猪组明显高于健康猪组，差异极显著；病猪组高于隐性感染组，差异极显著；隐性感染组与健康猪组差异不显著。TNF-α在病猪、隐性感染和健康猪血清中含量变化不大，差异不显著。试验结果显示，HP—PRRSV自然病例中血清IL-1明显升高，TNF-α含量无明显变化。 3、采用在饲料中添加IL-1和TNF-α抑制剂(阿司匹林，替米考星或氟苯尼考)为主的治疗方案对发生HP—PRRSV4个猪场共计339头病猪进行治疗，271头治愈，治愈率为79.4％，对5头发病猪在治疗前，治疗后3天，6天，9天分别采集血清进行IL-1和TNF-α动态定量监测，结果是IL-1含量在治疗后第9天下降明显，TNF-α在治疗期间变化不明显，说明阿斯匹林与替米考星或氟苯尼考联合应用，HP—PRRS病猪治疗后，有一定疗效。

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第一章文献综述

1.1猪繁殖与呼吸综合征研究进展

1.2猪主要致炎因子简介

第二章引言

第三章川渝地区HP-PRRSV分子流行病学调查

3.1材料

3.2方法

3.3结果

3.5讨论

第四章猪HP-PRRSV自然病例血清中IL-1与TNF-α含量测定

4.1材料

4.2方法

4.3结果

4.4讨论

第五章临床治疗HP-PRRS措施研究

5.1材料

5.2方法

5.3结果

5.4讨论

第六章结论

参考文献

附录

致谢

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