[目的] 利用SYBR Green I实时荧光定量多重PCR技术，结合融解曲线分析方法和液相芯片技术建立针对临床常见细菌耐药基因(大环内酯类耐药基因、β内酰胺酶类耐药基因)的多重检测技术平台，指导临床重症感染在细菌药敏试验结果没有报告之前的经验性用药治疗。 [方法] 选取经预先测序验证携带大环内酯类耐药基因ermA、ermB、ermC、msrA的葡萄球菌和携带β内酰胺酶类耐药基因tem、shv、ctx-m-1组、ctx-m-9组的大肠埃希氏菌和肺炎克雷伯菌作为阳性菌株，在SYBR Green I实时荧光定量多重PCR反应体系中加入可以扩增不同长度片段和产物具有不同融解温度(meltingtemperature Tm)的耐药基因引物和质控引物，以阳性携带菌株为检测对象，条件经优化后根据荧光定量曲线和产物特异的融解温度曲线，建立SYBR Green I实时荧光定量多重PCR检测大环内酯类耐药基因和β内酰胺酶类耐药基因筛查体系，同时用此筛查体系的阳性菌株扩增产物与分别交联有这八种耐药基因探针的荧光微球杂交，在液相芯片反应条件下建立耐药基因确证检测体系。利用筛查体系对含有一系列浓度梯度阳性菌株的不同临床样本进行检测，确定此筛查体系的灵敏度。用此多重耐药基因检测体系对各种不同临床标本来源的136株葡萄球菌、110株大肠埃希氏菌、94株肺炎克雷伯菌以及162例临床血液培养样本进行检测，检测结果和表型检测结果、电泳结果、测序结果进行比较。 [结果] 1. 耐药基因携带阳性菌株经优化后的SYBR Green I实时荧光定量多重PCR扩增，结合融解曲线分析快速筛查体系和液相芯片快速确证检测体系检测后与预先的测序结果比较达到100％的一致性； 2.筛查体系对多重耐药基因的检测灵敏度达到104CFU菌量，对单耐药基因的检测灵敏度达到103CFU菌量； 3.136株葡萄球菌经多重检测体系检测与表型检测结果比较，达到94.8％(129/136)的一致性，与琼脂糖凝胶电泳结果和测序结果比较达到100％的一致性。103株葡萄球菌被检出携带有常见大环内酯类耐药基因，耐药基因总检出率为75.7％(103/136)； 4.110株大肠埃希氏菌、94株肺炎克雷伯菌经多重检测体系检测和表型检测结果比较达到97.1％(198/204)一致性，分别有42.7％(47/110)大肠埃希菌和36.2％(34/94)肺炎克雷伯菌被检出携带常见的β内酰胺酶类耐药基因，与电泳结果及测序结果比较，达到100％的一致性； 5.162例临床血液培养样本经此多重检测体系检测有14例显示有菌感染，与血液培养仪检测结果一致，7例检出携带有大环内酯类或β内酰胺酶类耐药基因，与表型检测比较达到97.5％(158/162)的一致性，与电泳结果和测序结果比较达到100％的一致性； 6.统计分析此多重检测技术平台和表型检测比较差异无统计学意义(P>0.05) [结论] 1、SYBR Green I实时荧光定量多重PCR结合融解曲线分析方法和液相芯片技术可以快速筛查和准确检测常见葡萄球菌大环内酯类耐药基因和大肠埃希氏菌及肺炎克雷伯菌常见β内酰胺酶类耐药基因： 2、SYBR Green I实时荧光定量多重PCR结合融解曲线分析方法和液相芯片技术能用于临床血液样本常见大环内酯类耐药基因和β内酰胺酶类耐药基因的多重检测； 3、此耐药基因多重检测技术平台可以准确快速的应用于检测临床重症感染常见细菌耐药基因，对指导临床医生更合理使用抗生素进行临床治疗和对细菌耐药流行病学监测具有重要价值。
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