抗γH2AX抗体逆转K562/A02细胞耐药性的实验研究

摘要

多药耐药(multidrug-resistance，MDR)肿瘤细胞的出现是白血病化疗效果受限的主要原因，因此克服MDR是临床亟待解决的重要问题。肿瘤细胞MDR的形成机制有很多，DNA损伤修复能力增强是其中热点之一。近年来研究发现，由于化学、物理等外部因素导致细胞DNA双链断裂(DNA double-strand break，DSB)时，核心组蛋白H2AX的139位丝氨酸残基被磷酸化形成Y H2AX焦点，随后招募ATM、BRCAl、53BPI、MDCl等多种修复蛋白到损伤处发挥修复功能；并由此推测H2AX极有可能是逆转耐药的靶点。 兔抗H2AX磷酸化(Y H2AX)抗体具有特异性拮抗139位丝氨酸残基磷酸化的特点；环孢菌素(cyclosporine，CsA)是临床研究最早的MDR逆转剂之一；K562/A02细胞是有典型MDR表型的人红白血病耐药细胞株，它具有高mdrl mRNA水平、高P.糖蛋白(P-gp)表达的特性。本课题应用：MTT法、流式细胞术、单细胞凝胶电泳法及反转录一聚合酶链反应技术，以CsA为阳性对照，对抗Y H2AX抗体逆转K562/A02细胞耐药性的作用及其机制进行实验研究。 【目的】探讨抗γ H2AX抗体对K562/A02细胞多药耐药性的逆转作用及相关机制。 方法: (1)体外培养K562及K562/A02细胞，取对数生长期的细胞用于实验研究。 (2)MTT法检测抗Y H2AX抗体处理前后K562/A02细胞对ADR敏感性的变化，分析其耐药倍数和逆转倍数。 (3)单细胞凝胶电泳法检测抗Y H2AX抗体处理前后K562/A02细胞双链DNA损伤程度的变化。 (4)流式细胞术检测K562细胞、抗Y H2AX抗体处理前后K562/A02细胞的阿霉素平均荧光强度(mean fl Llorescerice intensity，MFI)。 (5)RT-PCR法检测K562细胞、抗Y H2AX抗体处理前后K562/A02细胞的mdrlmRNA表达水平。 (6)流式细胞术检测K562细胞、抗Y H2AX抗体处理前后K562/A02细胞的膜P-gp表达。 结论: (1)抗体可以部分逆转K562/A02细胞对ADR的耐药性。 (2)抗体逆转K562/A02细胞耐药性的机制之一：阻止K562/A02细胞双链DNA损伤后修复，从而增加ADR的杀伤力。 (3)抗体逆转K562/A02细胞耐药性的机制之二：下调mdrl mRNA的表达，降低细胞P-gp的表达和功能，增加K562/A02细胞对化疗药物的敏感性。

目录

声明

1前言

1.1研究背景

1.2研究目的

1.3研究内容

2材料和方法

2.1.材料

2.2方法

3结果

4讨论

5 小结

参考文献

文献综述:组蛋白H2AX的磷酸化及其在肿瘤中的研究进展

致谢

附录