Skp2在大鼠主动脉损伤后的表达及其与内膜增生的关系研究

摘要

[目的]
　　 研究Skp2在大鼠主动脉球囊损伤后动态表达及其与血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的关系，并探讨其对内膜增生作用的可能机制，为Skp2作为治疗血管成形术后再狭窄的新靶点提供理论基础。
　　 [方法]
　　 健康SD雄性大鼠56只，随机分为假手术组(8只)和单纯球囊损伤组(48只，包括2d、4d、7d、10d、14d、28d组)。2F Fogarty导管造成大鼠主动脉损伤，建立动物模型。各组分别于术后2、4、7、10、14、28天手术切取损伤主动脉作为实验标本。分别进行下列检测：(1)血管形态学检测：病理切片HE染色，光镜下观察血管内膜增生情况，并在计算机图像分析仪下测量、分析血管内膜面积；(2)SP染色法免疫组织化学检测PCNA、Skp2、p27Kipl表达。高倍光镜下观察并计算阳性细胞百分比，观察术后不同时间Skp2、p27Kipl与PCNA表达变化的关系。(3)Real Time RT-PCR检测各组Skp2和p27Kipl在mRNA水平的表达情况。(4)Western blotting检测各组Skp2和p27Kipl蛋白表达情况，观察其动态变化。
　　 [结果]
　　 1.球囊损伤后血管内膜开始增生，血管内膜面积与中膜面积(IA/MA)比值随着时间的推移逐渐升高，28天达到高峰(与假手术组比较，P<0.01)。
　　 2.免疫组化染色结果显示：(1)正常动脉几乎无PCNA阳性细胞表达，损伤术后2天开始出现PCNA阳性的VSMC细胞表达，并逐渐增多，至7天时达到高峰，此后表达逐渐下降，28天时内膜仅有少量表达，但仍高于正常水平(P<0.05)。(2)在正常动脉中Skp2阳性表达极低，术后2天表达开始升高，至10天时达高峰，术后14天迅速回落，28天降至最低，但仍高于正常水平(P<0.05)。(3)正常动脉中p27Kipl阳性细胞表达明显，术后2天明显下降，4天至7天表达仍较低，10天时p27Kipl阳性细胞表达迅速增加(P<0.05)，且以内膜为主。14天和28天维持在较高水平，与10天组相比，无显著性差异(P>0.05)。(4)Skp2和PCNA表达呈明显正相关(r=0.892，P<0.01)。
　　 3.Real Time RT-PCR和Western blotting结果显示正常动脉Skp2 mRNA和蛋白表达极低，术后2天Skp2 mRNA和蛋白表达开始升高，至10天时达到高峰(P<0.01)。14天后Skp2 mRNA和蛋白表达量开始下降，至28天进一步下降，但仍明显高于假手术组(P<0.05)。p27Kipl mRNA和蛋白在正常动脉中可见表达，术后4天p27Kipl mRNA和蛋白表达明显减少(P<0.05)。7天至10天时p27Kipl mRNA表达仍较低，14天p27Kipl mRNA表达明显升高，至28天时p27Kipl mRNA恢复至正常水平(P>0.05)。而p27Kipl蛋白于术后7天时表达已开始升高，至28天时达到高峰(P<0.05)。
　　 [结论]
　　 1.球囊损伤后动脉出现内膜增生，主要由VSMC增殖、迁移所致，术后28天新生内膜与中膜面积比值(IA/MA)达到高峰。
　　 2.Skp2是VSMC增殖及血管内膜增生的重要促进因子之一。
　　 3.在球囊损伤造成再狭窄的过程中，Skp2和p27KiPl两者间的表达量并不存在着此消彼长的关系，推测Skp2可能并不完全通过抑制p27KiPl而发挥其促进VSMC增殖及血管内膜增生的作用。
　　 4.Skp2有望成为再狭窄治疗的新的靶点。