LPS诱导YH1基因在鼻咽癌细胞株CNE-2Z细胞中的表达及对该细胞生长的影响

摘要

【目的】
　　 探测LPS可否诱导YH1(PLUNC)基因在人低分化鼻咽癌细胞株CNE-2Z细胞内表达及研究YH1基因表达后对人低分化鼻咽癌细胞株细胞生长增殖的影响,进一步探讨YH1基因在鼻咽癌发生发展中的作用机制。
　　 【方法】
　　 为实现本课题研究目的,RPMI1640培养基,10％小牛血清培养CNE-1/CNE-2Z细胞,待细胞状态良好时,采用以下方法分别实验:
　　 1.实时定量聚合酶链式反应(Real Time PCR)、反转录聚合酶链式反应技术(RT-PCR)检测LPS刺激人低分化的鼻咽癌细胞株CNE-2Z后YH1 mRNA表达水平。
　　 2.Western blot检测LPS刺激CNE-2Z细胞后YH1蛋白的表达水平。
　　 3.用重组真核表达质粒pcDNA4/His/Max-YH1转染HEK293T细胞,并用Western blot检测YH1蛋白的表达水平。
　　 4.MTT检测LPS诱导YH1高表达后对CNE-2Z细胞生长增殖的影响。
　　 5.激光扫描共聚焦显微镜观察YH1蛋白在CNE1/CNE-2Z细胞中的定位。
　　 【结果】
　　 1.不同浓度LPS刺激CNE-2Z细胞,YH1 mRNA表达水平随着LPS剂量的加大逐渐升高,至100ng/μl时达到最高,继续增加LPS浓度,YH1 mRNA表达水平不再增加。100ng/μl LPS刺激CNE-2Z细胞不同时间,在最初刺激的4小时内YH1mRNA表达水平有明显增加,然后迅速下降,而24小时再次增加至3.5倍。
　　 2.不同浓度LPS刺激CNE-2Z细胞24小时,YH1蛋白表达水平随着LPS剂量的加大逐渐升高,至100ng/μl时达到最高,与YH1 mRNA一致,也呈明显的剂量依赖效应。
　　 3.LPS诱导YH1高表达后能明显抑制CNE-2Z细胞的生长增殖。加入LPS组与对照组细胞细胞生长变化有统计学差异(P=0.000＜0.05),pcDNA4/His/Max-YH1-LPS与pcDNA4His/Max-YH1相比细胞生长变化有显著差异(P=0.000＜0.05)。
　　 4.YH1蛋白在CNE-1/CNE-2Z细胞浆中表达。
　　 【结论】
　　 LPS能有效诱导人鼻咽癌细胞株CNE-2Z细胞内源性表达YH1;内源性YH1在CNE-2Z细胞中高表达后能明显抑制CNE-2Z细胞的生长增殖。