Snail、MMP-9在结、直肠癌中的表达及临床意义

摘要

[目的]
　　 探讨在结、直肠癌组织中锌指转录因子Snail、基质金属蛋白MMP-9两种生物学指标的表达强度之间的相关性，以及与结、直肠癌中的癌旁组织、相对正常的黏膜上皮组织(癌远旁黏膜组织)之间的表达差异。并在不同的病理组织分期和癌细胞分化程度中的表达量的差异和相关性，来分析两者对大肠癌侵袭、转移的发挥的作用，以及它们在癌组织中的表达强度对于预测结、直肠癌浸润转移、恶性程度判断是否有临床意义。
　　 [方法]
　　 本文采用免疫组化技术S-P法和实时荧光定量PCR(QRT-PCR)，检测40例大肠癌患者(经医学伦理委员会批准及患者家属同意)，手术中诊断及术后病理检查证实为癌的新鲜结、直肠癌(大肠癌)组织，癌旁组织及大肠正常上皮组织(癌远旁黏膜组织)中Snail、MMP-9蛋白表达强度。其中男性24例，女性16例。年龄22-85岁。大于等于60岁的21例，小于60岁19例。大肠癌TNM分期按国际标准，Ⅰ期6例，Ⅱ期14例，Ⅲ、Ⅳ期共20例。分化程度：高分化者7例，中分化者24例，低分化者9例。40例组织标本于肿瘤切除后15min-30min之内切取，距肿瘤边缘2cm-4cm切除癌旁组织，距肿瘤最远处算作正常肠上皮组织。立即于-70摄氏度冰箱保存，用于QRT-PCR。剩余组织用固定10％中性福尔马林液，石蜡包埋切片用于免疫组织化学染色及HE染色中。
　　 [结果]
　　 (1)免疫组化的结果Snail以细胞膜和细胞质内均匀染色为棕黄色或棕色颗粒为免疫组化阳性染色的标准，MMP-9以细胞浆内出现棕黄色或棕色颗粒为阳性染色标准。在100倍及200倍视野下对组织切片全面观察后，随机选择4个视野，对细胞染色强度和着色细胞数进行评分和记录。根据染色强度分为无：不着色0分，弱：淡黄色1分，中：棕黄色2分，强：棕色3分。着色细胞百分比评分：0分(<5％，阴性)、1分(5％-10％)2分(10％-50％)3分(>50％).然后结合两者评分，所有有效数据处理采用SPSS-17.0软件包进行X2检验分析。癌组织中Snail与MMp9的阳性表达率高于癌旁组织中，癌旁组织中的阳性率大于相对正常的黏膜上皮(P<0.05)，Snail在癌组织中的阳性率为77.5％(31/40)，癌旁组织中的阳性率为47.5％(19/40)，在相对正常的大肠黏膜上皮中的阳性率为15％(6/40)。MMp-9癌组织中的阳性率为82.5％(33/40)，癌旁组织中的阳性率为45.0％(18/40)，在相对正常的大肠黏膜上皮组织中的阳性率为17.5％(7/40)。而两者之间在大肠癌组织中的表达量的分析也表明Snail与MMp9有一定相关性(r=0.433 P<0.05)。Snail与MMp9在患者临床与病理参数分析资料显示，癌组织中Snail和MMp9阳性表达量与患者的年龄无相关性而与癌组织细胞的分化程度和结、直肠癌TNM国际标准肿瘤分期有相关性。癌细胞的分化程度越低，肿瘤TNM分期越晚Snail与MMp9两种蛋白的表达量越高(P<0.05)，而TNM肿瘤分期是根据肿瘤的侵袭，浸润及转移的程度划分，一定程度上说明Snail与MMp9表达程度的高低可反映肿瘤的恶性程度。
　　 (2)通过QRT-PCR方法测定SnailmRNA、MMP-9mRNA两种生物学指标基因水平的表达程度。实验数据应用2-△△Ct如进行处理，计算40例组织样本直肠癌(大肠癌)组织，癌旁组织及大肠正常上皮组织(癌远旁黏膜组织)平均CT值和△CT值(△Ct=目的基因Ct-内参Ct)，计算2-△△C(△△ct=△Ct：癌组织样本0r癌旁组织样本-△Ct相对正常的大肠上皮组织)，其数值用于表示目的值相对于参照值的相对倍数，采用SPSS17.0统计软件进行数据分析，计量数据(X±s)表示，采用方差分析，P<0.05为差异有显著性。提示在结、直肠癌中的癌组织、癌旁组织，相对正常的黏膜上皮(癌远旁黏膜组织)的表达差异性。发现Snail、MMP-9基因在结、直肠癌中的癌组织的表达高于癌旁组织与相对正常的大肠黏膜上皮组织。验证免疫组织化学实验的结果。
　　 [结论]
　　 1.Snail、MMP-9在结、直肠癌组织中相对与癌旁组织，正常黏膜上皮组织(癌远旁黏膜组织)高表达；且两者成正相关性。
　　 2.癌细胞的分化程度越低，肿瘤TNM分期越晚Snail与MMp9两种蛋白的表达量越高，一定程度上说明Snail与MMp9表达程度的高低可预测肿瘤的恶性程度。为大肠癌的靶向治疗新提供研究领域。
　　 3.SnailmRNA、MMP-9mRNA的高表达，提示可为在基因水平上治疗大肠癌提供新的研究途径。