印度块菌(Tuber indicum)的分离纯化培养及其菌根促生细菌的研究

摘要

印度块菌（Tuberindicum）作为中国的主要商业块菌出口欧洲很多年，其形态和分子序列与法国黑孢块菌（TubermelanosporumVittad.）高度相似引起了人们的关注。对印度块菌的分类、生理生态、菌根合成等研究也在不断深入。本研究从印度块菌的菌丝体分离培养和菌根促生细菌的获得入手，进行了一系列实验，获得块菌分离纯化培养的条件及其有关数据;通过实验筛选获得促进印度块菌菌根形成的菌根促生细菌，能在人工培养块菌菌根的工作中得以应用。
　　 本研究从三个方面对印度块菌的分离纯化培养进行了实验和总结:(1)培养基的筛选:常用培养基、块菌培养成功的培养基、外生菌根菌菌丝培养时所用的培养基以及修饰培养基;(2)块菌分离方法的选择。实验中分别采用了组织分离法、孢子分离法和菌根分离法;(3)培养条件的选择。将接种后的培养基置于25℃培养箱中黑暗培养，待有菌丝长出后进行温度梯度的比较。最终实验结果表明(1)HM培养基适于印度块菌菌丝体的生长;在培养基中加入利于孢子萌发的物质，如松针浸出液、松根浸出液等对菌丝体的生长有帮助;(2)组织分离法是方便、快捷，可优先选择的方法，但该法培养成功率较低;孢子分离法与菌根分离法操作步骤较复杂，且污染率较高。
　　 本研究选择华山松为实验树种，挑选从根际土壤中分离到的11种细菌作为供试细菌，将印度块菌菌剂与细菌混合接种于华山松上，并通过对印度块菌与华山松形成的菌根数、华山松的株高和地径三方面的统计与分析来获得菌根促生细菌。实验最终获得浓度均为2.4×109cfu/ml的3种菌根促生细菌，即对菌根数、株高和地径均有极显著促进作用(P＜0.01)的Pseudomonassp.JCM5481(P143)、Streptomycessp.EN31(S191)、Variovoraxparadoxus(V633);以及浓度为0.8×109cfu/ml株的2种菌根促生细菌，即对菌根数、株高和地径均有显著促进作用(P＜0.05)的Pseudomonaschlororaphis(P11)、Pseudomonascorrugate(P127)。实验中对四种假单胞菌设置了浓度梯度，结果显示不同菌株适宜的浓度不同，表明细菌浓度是获得菌根促生细菌的一个重要影响因素。