十字花科根肿病室内接种标准化研究

摘要

十字花科根肿病是一种世界性的重要病害，由活体寄生性的芸苔根肿菌（Plasmodiophora brassicae Woronin）引致。近年来根肿病发生有加重的趋势，防治难度也不断加大。利用抗性品种是防治根肿病的一种有效手段，但抗性品种的选育和抗性评价均涉及到室内人工接种及病害分级标准。鉴于国内外目前在室内接种技术及病害分级标准上缺乏统一的标准，本文开展了相关研究，目的是建立一套十字花科根肿病室内接种标准体系。
　　 1.休眠孢子萌发鉴别
　　 对普通显微镜结构进行了改进，移动聚光器位置，使光线斜射入标本而表现微分干涉观察效果，并与3种染色方法对休眠孢子萌发鉴别效果作了比较。结果表明:改进的普通显微镜能够更好地区分休眠孢子是否萌发，这对后续萌发条件、接种标准化的研究奠定基础。
　　 2.孢子悬浮液的制备
　　 肿根不同腐烂温度、腐烂时间对榨菜发病的影响试验，结果显示在温度25℃、腐烂5天时，榨菜接种根肿菌后的发病率最高，表明该腐烂处理可提升休眠孢子的侵染。
　　 接种所用休眠孢子液制备中，肿根用无菌水稀释5倍，间歇性搅拌7min，获得的匀浆液先用1层纱布过滤、再用4层纱布过滤，获得的滤液中孢子的损失率最低，植物残渣少，孢子浓度能够被准确测量且孢子最高。
　　 3.接种方法比较及优化
　　 比较了两种接种方法，病土芯不同浓度、不同重量、不同直径，寄主不同生育期等接种条件对发病的影响。结果表明:菌土接种发病率(77.50％)低于灌根接种的发病率(87.50％)，但稳定性高于灌根接种;病土芯最优浓度为8×107个孢子/克，最优重量为20g，最优直径为25mm。在第1天接种的发病率(73.33％)显著低于育苗15天时接种的发病率(90.00％)。
　　 比较接种后40、50、60、70天的榨菜发病情况，结果表明，在第50天调查时，病情最稳定，发病率较高。可作为病害调查的最佳时间。
　　 4.病害调查与室内分级标准的建立
　　 比较了地上部分鲜重、全株鲜重、地上部鲜重与全株鲜重比与4种常用分级标准的相关性大小，结果表明:地上部鲜重与全株鲜重比与各分级标准均呈显著性相关，因此，该指标能准确反映苗期病害的严重度。
　　 对100株接种后的榨菜幼苗按单株地上部鲜重与全株鲜重比值大小进行分组，依据每组榨菜幼苗的症状描述，结合李妍、郭向华的分级标准，提出新的分级标准:0级:无肿瘤。1级:侧根肿大。3级:主根肿大，其直径小于茎基部的2倍，侧根肿大数量小于50％的根系。5级:主根肿大，其直径小于茎基部的3倍，侧根肿大数量占50％～75％的根系。7级:主根肿大，其直径是茎基部的3～4倍或侧根肿数量大于75％根系。9级:主根肿大，其直径大于茎基部的4倍。
　　 比较4种参考的分级标准和自拟分级标准在不同接种条件下的病情相关性差异，结果表明:自拟的分级标准在榨菜生长15天时，采用菌土接种对地上部鲜重与全株鲜重比值的相关性影响最大(R=-0.641)，自拟标准与参考分级标准均呈高度相关。表明自拟分级标准在该接种条件下，最能准确反映病情变化。且对十字花科大部分寄主都有适用性。

目录

声明

摘要

第一章 文献综述

1．症状与危害

2．根肿病菌的分类与生理小种

3．根肿病菌生物学特性

4．根肿病的发病条件

5．根肿菌室内接种流程

5．1 肿根接种前的预处理

5．2 休眠孢子悬浮液的制备

5．3 接种方法

5．4 接种浓度

5．5 病害分级

引言

第二章 休眠孢子萌发鉴别

1．材料与方法

1．1 供试病原菌

1．2 主要仪器用具

1．3 染色剂的配制

1．4 萌发试验

1．5 染色检查休眠孢子萌发

1．6 仿DIC显微镜(微分干涉相差显微镜)检查休眠孢子的萌发

2．结果与分析

2．1 3种染液对休眠孢子染色效果比较

2．2 仿DIC显微镜检查休眠孢子萌发

3．讨论

第三章 休眠孢子悬浮液的标准化制备

1．材料与方法

1．1 供试寄主植物

1．2 供试病原菌

1．3 主要仪器用具

1．4 腐烂处理

1．5 肿根组织中休眠孢子的优化提取

1．6 病害调查方法

2．结果与分析

2．1 肿根不同腐烂温度、时间对榨菜发病程度的影响

2．2 肿根稀释比例、搅拌时间对休眠孢子浓度的影响

2．3 纱布过滤对休眠孢子损失量的影响

3．讨论

第四章 接种方法标准化研究

1．材料与方法

1．1 供试寄主植物

1．2 供试病原菌

1．3 主要仪器用具

1．4 Hoagland营养液

1．5 寄主苗的培养

1．6 不同接种方法对榨菜、白菜根肿病发病的影响

1．7 菌土接种法中，不同浓度的病土芯对榨菜根肿病的发病影响

1．8 菌土接种法中，不同重量的病土芯对榨菜发病的影响差异

1．9 菌土接种法中，不同直径的病土芯对榨菜发病的影响差异

1．10 榨菜不同生育期菌土接种对榨菜发病的影响

1．11 榨菜根肿病在不同的调查时间的发病症状规律

2．结果与分析

2．1 不同接种方法对榨菜、白菜根肿病发病的影响

2．2 菌土接种法中，不同浓度的病土芯对榨菜发病影响

2．3 菌土接种法中，不同重量的病土芯对榨菜发病的影响

2．4 菌土接种法中，不同直径的病土芯对榨菜发病的影响差异

2．5 榨菜不同生育期菌土接种对发病的影响

2．6 榨菜根肿病在不同调查时间的发病程度差异

3．讨论

第五章 病害分级研究

1．材料与方法

1．1 供试寄主植物

1．2 供试病原菌

1．3 主要仪器用具

1．4 选择反映病害严重度的测量指标

1．5 室内分级标准的建立

1．6 自拟分级标准适用范围探讨

2．结果与分析

2．1 各分级标准的合理性评价及测量指标的选择

2．2 自拟分级标准的建立

2．3 自拟分级标准的适用范围

3．讨论

参考文献

附图

致谢

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