转化生长因子β1对犬穿透性角膜移植后免疫排斥的影响

摘要

目的:
　　 通过探究TGF-β1在犬穿透性角膜移植术(PKP)后在角膜中的表达变化规律并运用TGF-β1蛋白滴眼液点眼，来探索TGF-β1对角膜免疫排斥反应的影响。
　　 方法:
　　 (1)选取22只本地杂交犬随机分为2组，分别为生理盐水点眼组和供体组，每组9只，余下3只备用。PKP术后试验犬每日生理盐水点眼4次，每次点2滴。每日裂隙灯观察，根据Larkin评分标准记录免疫排斥反应发生时间。
　　 (2)选取35只本地杂交犬随机分为2组，分别为生理盐水点眼组，供体组，每组15只，余下5只备用。在生理盐水点眼组试验犬PKP术后1d，3d，7d和14d使用RT-PCR方法测量角膜中TGF-β1的表达量变化。
　　 (3)选取59只本地杂交犬随机分为3组，分别为TGF-β1点眼组，生理盐水点眼组，供体组，每组18只，余下5只备用。TGF-β1点眼组于PKP术后每日点4次TGF-β1蛋白浓度为50ρ1/ml的滴眼液，每日3次，生理盐水组以相同点眼方式点眼生理盐水，根据Larkin评分标准记录免疫排斥反应发生时间，并于术后3d，7d和14d，取角膜组织制作HE染色切片。
　　 试验结果:
　　 (1)生理盐水试验组在角膜移植术后的第5d发生2例排斥反应，术后第6d发生3例排斥反应，术后第7d发生3例排斥反应，术后8d发生1例排斥反应，角膜植片免疫排斥反应的平均时间为6.7±1.3天。
　　 (2)RT-PCR得到的数据处理采用相对定量的△△Ct法，根据各个基因的标准曲线，通过测试样的CT值得到相对应的数据，以此比较。TGF-β1表达量在术后1d为2.4倍，术后3d为2.9倍，此时的表达量为整个检测时间点中的最高峰值。TGF-β1表达量在术后3d以后呈现递减的趋势，术后7d为0.75倍，直到术后14d为最低值0.5倍。
　　 (3)在TGF-β1液滴定术眼试验中，用生理盐水滴眼的对照组，在角膜移植术后的5d发生两例排斥反应，术后6d发生4例排斥反应，术后7d发生5例排斥反应，术后8d发生3例排斥反应，最后两例于术后第9d发生。使用TGF-β1蛋白滴眼液的实验组于角膜移植术后11d发生第一例排斥反应，术后12d发生一例排斥反应，术后13d发生3例排斥反应，术后14d发生5例排斥反应，术后15d发生3例排斥反应，术后17d发生一例排斥反应，最后一例排斥反应发生于术后19d。TGF-β1蛋白滴眼液点眼的试验组的角膜植片存活的平均时间为13±2.1d，使用生理盐水点眼的对照组的角膜移植片存活平均时间为7±1.3d，试验组角膜植片的存活时间很显著的长于对照组，差异显著(P＜0.01)。
　　 (4)使用裂隙灯对穿透性角膜移植术后的植片进行临床观察并拍照记录，PKP术后3d观察角膜植片，生理盐水对照组的植片出现轻度的角膜水肿，裂隙灯光能透射前房，TGF-β1蛋白滴眼液点眼试验组的植片均呈现比较好的透明度，植片周围的植床呈现轻度的角膜水肿，裂隙灯光能透射前房。两组均未发生免疫排斥反应。PKP术后7d观察角膜植片，生理盐水对照组的植片有11例已经完全失去透明度，角膜严重增厚，植片周围有新生血管爬行。TGF-β1蛋白滴眼液试验组的角膜植片呈现中度水肿，裂隙灯光部分能透射前房，缝合处有少量新生血管爬行，试验组尚未发现免疫排斥反应的发生。PKP术后14d，生理盐水对照组所有植片重度水肿，植片完全失去透明度。TGF-β1蛋白滴眼液试验组的植片有10例发生免疫排斥反应，裂隙灯光无法穿透前房，瞳孔尚可见，角膜重度水肿。生理盐水对照组术后3d的组织切片观察可见，内皮层有部分缺失，基质胶原细胞排列有序，基质层轻度水肿，上皮层略有损伤。术后7d的组织切片观察可见，内皮层脱落，基质层中度水肿，上皮层部分缺失或脱离基质层。术后14d的组织切片观察可见，内皮层完全脱落，后弹力层部分缺失，上皮层部分缺失，基质层严重水肿;TGF-β1试验组术后3d的组织切片观察可见，角膜上皮细胞完成，排列有序，基质层无明显水肿，内皮细胞完整。术后7d，内皮细胞仍然附着于后弹力层但内皮细胞数量减少，上皮层完成，上皮细胞排列有序。术后14d，内皮细胞脱落，基质层中度水肿，上皮细胞完整。
　　 结论:
　　 (1) TGF-β1作为滴眼液能有效抑制免疫排斥反应。
　　 (2) TGF-β1的低表达与免疫排斥反应的发生有关。

目录

声明

摘要

第1章 文献综述

1．1 角膜的组织结构与生理功能

1．2 犬穿透性角膜移植术

1．3 正常角膜的免疫赦免

1．4 穿透性角膜移植术免疫排斥反应

1．5 TGF-β1与免疫耐受

第2章 引言

第3章 犬穿透性角膜移植术后免疫排斥发生时间的研究

3．1 试验材料与方法

3．2 试验结果

3．3 讨论与分析

3．4 小结

第4章 犬角膜移植术后TGF-β1表达变化的研究

4．1 试验材料和方法

4．2 试验结果

4．3 分析与讨论

4．4 小结

第5章 TGF-β1液滴定PKP术眼后免疫排斥发生时间的观察

5．1 试验材料与方法

5．2 试验结果

5．3 讨论与分析

5．4 小结

第6章 全文总结和创新点

6．1 全文结论

6．2 创新点

参考文献

附录 中英文缩略词表

致谢

攻读硕士期间论文发表情况