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摘要
第1章 综述
1.1 喹诺酮类药物的抗菌谱和抗结核活性
1.2 喹诺酮类药物的作用靶标
1.3 普遍接受的杀菌途径假说
1.3.1 形成断裂复合物
1.3.2 缓慢抑菌与DNA合成的抑制
1.3.3 快速杀菌与染色体片段化
1.4 活性氧杀菌假说
1.5 耐药机制
1.5.1 靶标Ⅱ型拓扑异构酶的突变
1.5.2 细菌细胞膜通透性的改变
1.5.3 药物外排泵的主动外排
1.5.4 质粒介导的耐药
1.6 结核分枝杆菌的原核类泛素化和PafABC的功能
1.6.1 结核分枝杆菌的原核类泛素化参与的酶和过程
1.6.2 蛋白酶体辅助因子操纵子PafABC的功能
1.6.3 结核分枝杆菌原核类泛素化的功能
第2章 前言
2.1 研究目的及意义
2.2 研究内容及技术路线
第3章 实验材料和方法
3.1 实验材料和试剂
3.1.1 数据信息与来源
3.1.2 实验菌株和载体
3.1.3 实验主要试剂
3.1.4 实验仪器
3.1.5 主要培养基和溶液的配制
3.2 实验方法
3.2.1 验证突变株M371的莫西沙星的敏感表型
3.2.2 结核分枝杆菌H37Rv Rv2095c基因的PCR引物设计与合成
3.2.3 结核分枝杆菌H37Rv Rv2095c基因的体外扩增
3.2.4 PCR产物的柱式胶回收纯化
3.2.5 大肠杆菌感受态细胞的制备及转化
3.2.6 基因Rv2095c的TA克隆
3.2.7 质粒抽提
3.2.8 Rv2095c基因连接至pALACE质粒,并转化至大肠杆菌DH5α保种
3.2.9 重组质粒pALACE-Rv2095c电转化到M.smegmatis M371
3.2.10 回补菌株重组蛋白的表达及鉴定
3.2.11 验证回补菌株对莫西沙星的敏感性
3.2.12 菌落形态
3.2.13 滑动试验
3.2.14 对SDS和双氧水耐受测试——MTT法
3.2.15 测定细菌细胞壁的脂溶性指数
第4章 结果与分析
4.1 M371菌株对莫西沙星敏感性的验证
4.2 分枝杆菌属蛋白酶体辅助因子进化分析
4.3 Rv2095c基因的PCR扩增和鉴定
4.4 回补菌株M371-pALACE-Rv2095c的构建
4.5 western-blot检测Rv2095c基因在M371回补菌株中的表达
4.6 验证回补菌株莫西沙星的敏感表型
4.7 菌落形态
4.8 滑动试验
4.9 对SDS和双氧水的耐受
4.10 脂质系数的变化
第5章 结论与展望
5.1 实验结论与讨论
5.2 展望
参考文献
致谢
在校期间所发文章
西南大学;