灰毡毛忍冬与忍冬化学成分及药理作用的比较研究

摘要

背景:
　　自从2005版《中国药典》新增了药材灰毡毛忍冬，同时将忍冬属药材分列为“金银花”与“山银花”之后，以灰毡毛忍冬为代表的“金银花”与“山银花”在化学成分、功能主治等方面的相同或者不同就成为一个新的问题。这个问题引发了两者在临床应用、质量评定、政策管理、市场流通、经济价值、民族文化等一系列问题。迄今为止尚没有对新增品种“灰毡毛忍冬”的主要药效学的系统研究，及其与传统金银花的比较研究。
　　目的:
　　1.比较灰毡毛忍冬与忍冬主要化学成分及其含量的异同。
　　2.比较灰毡毛忍冬与忍冬主要药效学作用的异同。
　　方法:
　　1.化学成分测定采用高效液相色谱(high performance liquid chromatogram，HPLC)法同时测定河南封丘忍冬，山东平邑忍冬以及重庆秀山灰毡毛忍冬中绿原酸、咖啡酸及木犀草苷的含量;采用HPLC法测定上述3药材中3，5-二咖啡酰奎宁酸的含量;采用高效液相-蒸发光散射（high performance liquidchromatogram-evaporative light scattering detector, HPLC-ELSD）法同时测定上述3药材中灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙的含量;采用紫外分光光度法(ultraviolet and visible，UV)测定上述3药材中总黄酮的含量。
　　2.抗菌作用采用平板纸片法对河南封丘忍冬，山东平邑忍冬，重庆秀山灰毡毛忍冬进行药物敏感性测试;用96孔板法分别测定3药材对八叠球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、金黄色葡萄球菌、伤寒杆菌和枯草芽孢杆菌等六种常见致病菌的最小抑菌浓度（minimal inhibitory concentration，MIC）与最小杀菌浓度(minimum bactericidal concentration, MBC)。
　　3.抗炎作用
　　(1)采用醋酸致小鼠毛细血管通透性增加模型，将小鼠分为正常组、模型组、阳性组（阿司匹林0.2 g·kg-1）、封丘忍冬组(10 g·kg-1)、平邑忍冬组(10 g·kg-1)、秀山灰毡毛忍冬组（10 g·kg-1），计算抑制率。(2)采用二甲苯致小鼠耳廓肿胀模型，分组同上，计算耳肿胀值和耳肿胀抑制率。(3)采用角叉菜胶致大鼠足肿胀模型，分组同上，通过测定不同组大鼠足肿胀值的净值，计算抑制率。(4)采用棉球诱导大鼠肉芽组织增生模型，除去正常组，分组同上，通过测量不同组棉球肉芽肿净值，计算抑制率。
　　4.解热作用采用皮下注射酵母粉致大鼠发热模型，将大鼠分为正常组、模型组、阳性组（阿司匹林0.2 g·kg-1）、封丘忍冬组(10 g·kg-1)、平邑忍冬组(10g·kg-1)、秀山灰毡毛忍冬组(10 g·kg-1)。通过测量给药6h内不同时间点大鼠体温，对3药材的解热作用进行比较。
　　5.免疫调节作用
　　(1)采用环磷酰胺建立小鼠免疫低下模型，将小鼠分为正常组、环磷酰胺组、阳性组（香菇菌多糖4.5 mg·kg-1）、封丘忍冬组(10 g·kg-1)、平邑忍冬组(10g·kg-1)、秀山灰毡毛忍冬组(10 g·kg-1)，通过测定免疫器官重量，计算脾脏和胸腺指数。(2)采用环磷酰胺建立小鼠免疫低下模型，分组同上，计算碳廓清指数K和吞噬指数。(3)除开环磷酰胺组，将大鼠按照(1)方法分组，观察3药材对正常大鼠白细胞数量的增加作用。
　　结果:
　　1.化学成分测定封丘忍冬，平邑忍冬及秀山灰毡毛忍冬中绿原酸含量分别为4.938％、4.575％、9.415％;咖啡酸含量分别为0.013％、0.021％、0.021％;木犀草苷含量分别为0.081％、0.091％、0.038％;3，5-二咖啡酰奎宁酸含量分别为1.858％、1.9195％、5.129％;总黄酮含量分别为6.815％、6.688％、11.750％。秀山灰毡毛忍冬中灰毡毛忍冬皂苷乙与川续断皂苷乙的含量分别为4.352％、2.467％，封丘忍冬与平邑忍冬中未检测到灰毡毛忍冬皂苷乙与川续断皂苷乙。
　　2.抗菌作用封丘忍冬、平邑忍冬及秀山灰毡毛忍冬对八叠球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、金黄色葡萄球菌、伤寒杆菌和枯草芽孢杆菌的抑菌圈分别为13.0、4.8、3.2、7.4、8.0、10.0mm,3.2、4.6、7.0、7.2、2.0、6.6mm,8.2、13.4、9.8、10.4、8.2、9.0 mm; MIC分别为500.0、500.0、250.0、500.0、7.8、250.0 mg·mL-1,125.5,125.5、15.7、15.7、15.7、15.7 mg·mL-1,7.8、62.8、62.8、31.4、62.8、7.8mg·mL-1; MBC分别为500.0、500.0、1000、＞1000、1000、500 mg·mL-1,＞1000、500.0、＞1000、＞1000、＞1000、1000 mg·mL-1,250、＞1000、＞1000、1000、＞1000、250 mg·mL-1.
　　3.抗炎作用封丘忍冬、平邑忍冬及秀山灰毡毛忍冬(10 g·kg-1)对小鼠腹腔毛细血管通透性增加的抑制率分别为58.65％、45.19％、55.77％(P＜0.001)，对大鼠足肿胀的最高抑制率分别为46.67％、47.62％、48.28％（P＜0.05），对肉芽肿的抑制率分别为30.9％、27.2％、37.8％(P＜0.001)，封丘忍冬能够显著抑制耳肿胀，抑制率为45.1％(P＜0.05)，平邑忍冬和秀山灰毡毛忍冬只有抑制小鼠耳肿胀的趋势，抑制率分别为38.6％、12.2％(P＞0.05)。
　　4.解热作用封丘忍冬、平邑忍冬及秀山灰毡毛忍冬(10 g·kg-1)对致热大鼠有降温趋势，但与模型组无显著性差异(P＞0.05)。5.免疫调节作用封丘忍冬、平邑忍冬及秀山灰毡毛忍冬(10 g·kg-1)均能够显著提高免疫低下小鼠的脏器指数（胸腺指数分别为9.44±1.47、8.43±1.29、9.18±1.16 mg·10g-1，脾脏指数分别为20.16±1.73、19.63±2.42、20.08±2.34 mg·10g-1)，廓清指数K(分别为(2.03±0.59)×10-2、(1.56±0.74)×10-2、(1.80±0.65)×10-2)，吞噬指数（分别为5.26±0.87、4.74±1.00、5.21±1.03）(P＜0.001)，封丘忍冬和平邑忍冬能够明显增加大鼠白细胞数量(均为(9.15±1.65)×109·L-1)(P＜0.05)，而秀山灰毡毛忍冬只存在增加趋势((8.45±1.30)×109·L-1)(P＞0.05)。
　　结论:
　　1.秀山灰毡毛忍冬中绿原酸、3，5-二咖啡酰奎宁酸、总黄酮的含量高于封丘忍冬和平邑忍冬;秀山灰毡毛忍冬与平邑忍冬中咖啡酸的含量一致并且高于封丘忍冬;秀山灰毡毛忍冬中木犀草苷的含量低于封丘忍冬和平邑忍冬;从封丘忍冬与平邑忍冬中皆未检测到灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙两个成分。归纳可以看出，在所测得的7个化学成分中，除开木犀草苷偏低外，其他6个成分在秀山灰毡毛忍冬中的含量要高于封丘忍冬和平邑忍冬。
　　2.封丘忍冬、平邑忍冬和秀山灰毡毛忍冬均具有抗菌、抗炎作用和解热趋势，并且都能够增强动物非特异性免疫，综合起来，3药材在以上4个药理作用方面效果基本一致。

目录

声明

摘要

前言

第一章 灰毡毛忍冬与忍冬化学成分的比较研究

第一节 灰毡毛忍冬与忍冬中绿原酸，咖啡酸及木犀草苷含量测定

1 实验材料

2 绿原酸，咖啡酸及木犀草苷含量测定方法的建立

3 实验结果

4 小结

5 讨论

第二节 灰毡毛忍冬与忍冬中3，5-二咖啡酰奎宁酸含量测定

1 实验材料

2 3，5-二咖啡酰奎宁酸含量测定方法的建立

3 实验结果

4 小结

5 讨论

第三节 灰毡毛忍冬与忍冬中灰毡毛忍冬皂苷乙及川续断皂苷乙含量测定

1 实验材料

2 灰毡毛忍冬皂苷乙及川续断皂苷乙含量测定方法的建立

3 实验结果

4 小结

5 讨论

第四节 灰毡毛忍冬与忍冬中总黄酮含量测定

1 实验材料

2 总黄酮含量测定方法的建立

3 实验结果

4 小结

5 讨论

第二章 灰毡毛忍冬与忍冬药理作用的比较研究

第一节 灰毡毛忍冬与忍冬抑菌作用的比较研究

1 实验材料

2 实验方法

3 实验结果与分析

4 讨论

第二节 灰毡毛忍冬与忍冬抗炎作用的比较研究

1 实验材料

2 实验方法

3 实验结果与分析

4 讨论

第三节 灰毡毛忍冬与忍冬解热作用的比较研究

1 实验材料

2 实验方法

3 实验结果与分析

4 讨论

第四节 灰毡毛忍冬与忍冬免疫调节作用的比较研究

1 实验材料

2 实验方法

3 实验结果与分析

4 讨论

全文总结

创新点及意义

思考与展望

参考文献

附图

文献综述

致谢

硕士学位期间科研工作汇报

附：英汉缩略语对照表