5F(ent-11α-hydroxy-15-oxo-kaur-16-en-19-olic acid)联用顺铂阻断Wnt/β-catenin信号通路诱导非小细胞肺癌H23细胞凋亡的影响

摘要

目的：研究半边旗提取物5F与顺铂联用对人非小细胞肺癌H23细胞生长增殖的抑制作用，探讨两药联用阻断Wnt/β-catenin信号通路诱导非小细胞肺癌H23细胞凋亡的机制，为临床抗肿瘤治疗提供实验和理论依据。
　　 方法：以人非小细胞肺癌H23细胞株为实验对象，将其分为四组:对照组（只加入RPMI1640培养液）、5F组（加入5F浓度为40μg/mL的RPMI1640培养液）、顺铂组（加入顺铂浓度为5μg/mL的RPMI1640培养液）和联合用药组（加入5F40μg/mL+顺铂5μgmL的RPMI1640培养液）。MTT比色法分析5F与顺铂单独及联用对非小细胞肺癌H23细胞生长增殖的抑制作用，根据公式q=E(A+B)/[EA+（1-EA）×EB]计算两药联合应用的效应;流式细胞技术检测5F与顺铂单独及联用对H23细胞周期变化的影响;Annexin V-FITC荧光染色观察5F与顺铂单独及联用诱导H23细胞凋亡的改变，且以流式细胞技术检测各处理组的细胞凋亡率;qRT-PCR法分析5F与顺铂单独及联用对Wnt/β-catenin信号通路主要基因β-catenin、GSK-3β、CyclinD1、c-Myc mRNA表达的影响;Western-blot法分析5F与顺铂单独及联合应用对Wnt/β-catenin信号通路关键因子β-catenin、GSK-3β蛋白表达的影响。
　　 结果：⑴MTT比色法结果显示:5F与顺铂单独及联用在24h，48h及72h均能抑制H23细胞生长增殖并呈时间依赖关系，联用组细胞增殖抑制率明显高于两单药组，差异具有统计学意义(P＜0.05)，且根据公式q=E(A+B)/[EA+（1-EA）×EB]计算，5F与顺铂联用处理H23细胞48h时后q＞1.15，提示两药联用具有协同作用。⑵流式细胞技术检测各处理组作用48h后，H23细胞周期的改变，结果显示:与对照组比较，5F组，顺铂组及联和用药组的G0/G1期细胞增多，同时S期及G2/M期细胞减少(P＜0.05)，与单独用药组比较，联合用药组的G0/G1期细胞明显增多，而S期及G2/M期细胞明显减少(P＜0.05)。⑶Annexin V-FITC荧光染色观察各处理组作用48h后，H23细胞凋亡的改变，及流式细胞技术检测细胞凋亡率，结果示:与对照组比较，各处理组细胞生长密度变稀疏，细胞呈典型的凋亡形态，细胞膜染色呈绿色，且联用组较单独用药组更明显;与对照组比较，各处理组凋亡率均上升(P＜0.05)，与单独用药组比较，联用组凋亡率明显上升(P＜0.05)。⑷qRT-PCR法分析各处理组作用48h后，H23细胞中β-catenin、GSK-3β、CyclinD1、c-Myc mRNA表达情况，结果示:5F，顺铂及联用均能下调H23细胞中的β-catenin、CyclinD1、c-myc mRNA表达，上调GSK-3βmRNA表达(P＜0.05)，与单独用药组比较，联合用药组作用效应更明显(P＜0.05)。⑸Western-blot法分析各处理组作用48h后，H23细胞中β-catenin，GSK-3β蛋白的表达水平，结果示:5F，顺铂及联用均能下调H23细胞中总β-catenin蛋白表达水平，上调GSK-3β蛋白表达(P＜0.05)，与单独用药组比较，联合用药组作用效应更明显(P＜0.05)。
　　 结论：①5F与顺铂单独及联用均能抑制人非小细胞肺癌H23细胞生长增殖，且两药联用具有协同作用。②5F与顺铂联用能协同抑制Wnt/β-cetenin信号通路传导，诱导非小细胞肺癌H23凋亡，其机制可能与调控GSK-3β/β-catenin的表达相关。

目录

声明

摘要

1 前言

1．1 研究背景

1．2 研究目的

1．3 研究内容

2 材料与方法

2．1 材料

2．2 方法

3 结果

4 讨论

5 小结

参考文献

文献综述 Wnt和相关信号通路交互作用在非小细胞肺癌发生发展中的作用

致谢

附录一 缩写词中英文对照

附录二：在读期间的科研情况