模拟运输应激对大鼠肺脏免疫机能及TLR4-NF-κB信号通路的影响

摘要

现代养殖的集约化程度不断提高，导致动物的长途运输变得越来越普遍。由于长途运输途中禁食或限饲、噪音、高温、颠簸、心理压力等因素的综合作用，常引起动物产生严重的运输应激反应，降低了动物的生产性能、免疫机能和肉品质量，造成重大经济损失以及健康隐患。因此，本研究选用大鼠作为实验动物，制作大鼠模拟运输应激模型，以研究运输应激对动物的肺脏组织及肺泡巨噬细胞免疫功能的影响。
　　1.将SD大鼠适应饲养7d后，于每日9:00-11:00将模拟运输组大鼠置于35℃、60r/min的水平摇床振荡摇晃，连续3天，模拟运输过程中的摇晃、高温、噪音、拥挤等因素，构建大鼠运输模型，以观察模拟运输应激对大鼠的临床症状、体重、血清TNF-α、IL-6、皮质酮及肺脏组织结构的影响。结果表明:(1)模拟运输应激可引起大鼠精神紧张，行动迟缓，全身发抖，被毛凌乱，呼吸急促，尿量减少且发黄，粪便干结且萎缩。(2)模拟运输应激可引起大鼠体重显著低于对照组(P＜0.05)。(3)模拟运输应激可使大鼠血清TNF-α和IL-6浓度升高，且IL-6显著高于对照组(P＜0.05)。(4)模拟运输应激可引起大鼠血清皮质酮浓度显著高于对照组(P＜0.05)。(5)模拟运输应激可造成大鼠肺泡不均匀扩张，部分肺泡间隔断裂;小静脉扩张充血，炎症细胞浸润，部分肺泡腔内可见水肿。因此，经每日35℃、60r/min摇晃两个小时，连续3天，可引起大鼠出现严重的运输应激及肺组织损伤。
　　2.通过提取大鼠肺脏组织mRNA，经反转录扩增后，进行相关免疫指标基因扩增，检测IL-1β、IL-6、TNF-α、IFN-γ、TLR4、β-actin的mRNA表达量，结果表明:模拟运输应激能显著降低肺脏组织TNF-α、IFN-γ mRNA的表达量(P＜0.05);同时TLR4、IL-1β、IL-6 mRNA的表达量略有增加，但与对照组相比并不显著，说明模拟运输应激可抑制大鼠肺脏组织的免疫功能。
　　3.大鼠模拟运输应激造模结束后，采用反复冲洗法收集大鼠肺泡巨噬细胞，抽提大鼠肺泡巨噬细胞总蛋白，Western Blot法检测NF-κB p65、Phospho-NF-κB p65、IκBα、Actin蛋白表达量。结果表明:模拟运输应激可提高肺泡巨噬细胞NF-κB p65磷酸化水平，显著降低抑制蛋白IκBα的表达量(P＜0.05)，说明模拟运输应激可激活肺泡巨噬细胞的NF-κB信号通路，将诱导下游前炎性细胞因子的表达和分泌。
　　因此，模拟运输应激可引起大鼠血液皮质酮含量急剧升高，损伤肺脏组织结构，并抑制肺脏免疫机能，可激活肺泡巨噬细胞NF-κB信号通路，诱导前炎性细胞因子的分泌和表达。

目录

声明

英文缩写

摘要

第一章 文献综述

1 应激概述

2 运输应激对动物机体的影响

3 肺脏免疫系统及其机能

4 TLR4-NF-κB信号通路与炎症

5．研究目的意义

第二章 引言

第三章 模拟运输应激对大鼠临床症状、血清TNF-α、IL-6、皮质酮浓度及肺组织结构的影响

1 材料

2 方法

3 结果

4 分析与讨论

5 小结

第四章 模拟运输应激对大鼠肺脏组织TLR4、IL-1β、IL-6、TNF-α、IFN-γ mRNA表达量的影响

1 材料

2 方法

3 结果

4 分析与讨论

5 小结

第五章 模拟运输应激对大鼠肺泡巨噬细胞TLR4-NF-κB信号通路的影响

1 材料

2 方法

3 结果

4 讨论与分析

5 小结

第六章 结论

参考文献

致谢

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