胞磷胆碱改善缺氧/缺氧无糖诱导的内皮功能障碍及上调紧密连接蛋白表达

摘要

目的：⑴观察缺氧/缺氧无糖环境对内皮细胞屏障功能的影响。⑵研究在缺氧/缺氧无糖环境下，内皮细胞中紧密连接蛋白的变化。⑶探讨在缺氧/缺氧无糖环境下，胞磷胆碱对内皮细胞屏障功能的影响及探讨其是否可通过上调紧密连接蛋白的表达来发挥作用。 方法：运用人脐静脉内皮细胞(HUVEC)及小鼠脑微血管内皮细胞(bEnd.3)两个细胞系通过24h缺氧及6h缺氧无糖处理来建立内皮屏障破坏模型。据是否给予胞磷胆碱治疗分为模型组及胞磷胆碱组(0.1mmol/L，1.0mmol/L)，采用FITC-Dextran荧光染料渗透实验检测内皮屏障功能，Real time PCR，Western blot检测紧密连接蛋白ZO-1，Occludin，Claudin-5表达水平的变化，免疫荧光检测以上紧密连接蛋白的分布和表达情况。 结果：①与对照组相比，HUVEC及bEnd.3经过缺氧或缺氧无糖作用后，荧光渗透值均显著增加。②荧光定量PCR及Western Blot检测显示HUVEC模型组ZO-1及Occludin的表达水平明显减少(P＜0.01)，bEnd.3模型组ZO-1及Claudin-5的表达水平亦明显减少(P＜0.01);免疫荧光结果示HUVEC细胞中ZO-1分布发生改变，大部分从胞膜转移入胞浆。③HUVEC模型组及bEnd.3模型组予低浓度及高浓度的胞磷胆碱作用后，荧光渗透值均明显降低(P＜0.01)。④荧光定量PCR及Western Blot检测表明HUVEC胞磷胆碱组的ZO-1及Occludin的表达水平增加(P＜0.01)，bEnd.3胞磷胆碱组的ZO-1，Claudin-5表达水平增加(P＜0.01)，且高浓度的胞磷胆碱组效果更明显;免疫荧光结果示ZO-1大部分恢复膜定位。 结论：缺氧及缺氧无糖的环境可损坏内皮屏障功能;胞磷胆碱可通过上调特定紧密连接蛋白如ZO-1，Occludin，Claudin-5的表达水平或恢复其定位，来改善内皮屏障功能。

目录

声明

摘要

1 前言

1．1 研究背景

1．2 研究目的

1．3 研究内容

2 材料与方法

2．1 实验材料

2．2 实验方法

3 结果

4 讨论

5 小结

参考文献

综述 胞磷胆碱治疗脑卒中及相关疾病的研究进展

附录一：缩写词中英文对照

附录二：在读期间的科研情况