联合雷帕霉素、吉西他滨、阿霉素对人胆管癌HCCC--9810细胞增殖和促进细胞凋亡的实验研究

摘要

目的：探讨雷帕霉素（Rapamycin，RAP）、吉西他滨(Gemcitabine，GEM)、阿霉素(Doxorubicin，DOX)抗胆管癌HCCC-9810细胞增殖和促进凋亡的交互作用及其可能机制。 方法：MTT法、FITC AnnexinⅤ流式细胞技术检测雷帕霉素、吉西他滨、阿霉素单药干预后的人胆管癌HCCC-9810细胞的细胞增殖活力、细胞凋亡率以确立RAP、GEM、DOX联合用药的浓度。MTT试验、流式细胞技术、Western Blot技术、细胞划痕试验分别检测RAP、GEM、DOX联合用药实验中胆管癌细胞系HCCC-9810细胞增殖活力，细胞周期及凋亡、蛋白的表达、细胞的生长迁徙。 结果：⑴RAP、GEM、DOX联合干预的浓度分别为25nmol/L、50μmol/L、1μmol/L。RAP×GEM、RAP×DOX、GEM×DOX对HCCC-9810细胞增殖抑制分别具有4.04％、6.89％、9.98％拮抗效应(P＜0.01)，而RAP×GEM×DOX对HCCC-9810细胞增殖具有4.19％协同抑制作用(P＜0.01)，GEM+DOX组合对胆管癌细胞增殖抑制率(48.76％)最高，其次为RAP+GEM+DOX组(46.29％)，两者无明显差异;RAP+DOX、GEM+DOX、RAP+GEM+DOX组显著促进HCCC-9810细胞凋亡(P＜0.05)，RAP+GEM+DOX组的HCCC-9810细胞总凋亡率最高（31.03±4.65）％，其次为GEM+DOX组（23.55±2.89）％，而两者比较无显著差异(P＞0.05)。RAP协同DOX促进HCCC-9810细胞凋亡(F=8.55，P＜0.05)，该效应为5.37％;RAP+GEM、RAP+DOX、GEM+DOX、RAP+GEM+DOX抑制HCCC-9810细胞生长迁徙。⑵GEM+DOX组诱导HCCC-9810细胞S期阻滞(P＜0.05); RAP+GEM组诱导HCCC-9810细胞G0/G1期阻滞(P＜0.05); RAP、GEM、DOX的药物干预组合均显著抑制HCCC-9810细胞进入G2/M期(P＜0.01)。⑶RAP+DOX组显著下调p-mTOR蛋白表达水平(P＜0.01); GEM+DOX组显著下调Survivin、VEGF-C蛋白表达水平(P＜0.01); RAP+GEM+DOX组显著下调Survivin、p-mTOR、VEGF-C蛋白表达水平(P＜0.01或0.05)。 结论：GEM+DOX联合作用拮抗地抑制胆管癌HCCC-9810细胞增殖，而RAP+GEM+DOX协同地抗胆管癌HCCC-9810细胞增殖。抗胆管癌HCCC-9810细胞增殖和促胆管癌细胞凋亡作用最强的组合是GEM+DOX和（或）RAP+GEM+DOX。RAP能协同增强DOX促胆管癌HCCC-9810细胞凋亡作用。RAP、GEM、DOX导致HCCC-9810细胞增殖抑制与G2/M期细胞百分比减少明显相关。RAP、GEM、DOX联合用药可能通过下调VEGF-C、p-mTOR、Survivin蛋白的表达，抑制胆管癌细胞增殖，促进胆管癌细胞凋亡。GEM、DOX联合用药可能通过诱导HCCC-9810细胞S期阻滞和下调Survivin、VEGF-C蛋白的表达，促进细胞凋亡并抑制细胞增殖。RAP、DOX可能通过下调p-mTOR蛋白水平促进细胞凋亡。

目录

声明

摘要

1 前言

1．1 研究背景

1．2 研究目的

1．3 研究内容

2 材料与方法

2．1 实验材料

2．2 实验方法

3 结果

4 讨论

5 小结

参考文献

综述 肝门部胆管癌非手术治疗研究进展

致谢

缩写词中英文对照

在读硕士期间的科研情况