饲喂漂白粉液浸消叶对蚕体生理及肠道产酶菌的影响

摘要

用漂白粉液浸消桑叶全程饲喂家蚕已经成为有效防控微粒子病的方法，被广泛应用在蚕种生产上。但家蚕饲喂消毒桑叶后出现了体质减弱、饲育成绩下降等现象，针对这些问题，学者们从家蚕饲育成绩方面着手进行了探究，但更深层次的关于家蚕生理方面及肠道微生物菌群变化的研究鲜有报道。本实验用不同有效氯浓度（0.3％、0.4%、0.5%、0.6%）漂白粉液浸消后晾干的桑叶饲喂4龄起蚕直到其上蔟，以清水组为对照，另设全程0.3%处理组，即从收蚁至上蔟全程饲喂0.3%有效氯浓度漂白粉液浸消叶。调查统计了家蚕饲喂浸消叶后幼虫期生长发育指标、茧期相关生理指标的变化；测定了5龄1天、3天、5天、7天家蚕肠液蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶的活性及血液超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、过氧化物酶（POD）的活性，并比较分析不同处理组与对照组之间的差异；用NA培养基分离纯化了家蚕肠道细菌，分析了不同处理组与对照组家蚕肠道细菌数量的差异；利用不同筛选培养基研究了不同处理组与对照组家蚕肠道产消化酶（蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶、纤维素酶）细菌的菌株数量、产酶种类及相对产酶能力等的差异；用16S rDNA测序技术对产酶菌分离株进行了鉴定，比较不同处理组及对照组产酶菌种类的不同。通过实验，主要得到以下结果：
　　1、从4龄起饲喂漂白粉液浸消叶的实验组中，有效氯浓度为0.3%时明显促进了4龄家蚕体重增长；有效氯浓度为0.5%和0.6%时显著抑制了4龄家蚕体重的增长，显著减弱了5龄家蚕消化量和消化率；而全程饲喂0.3%有效氯浓度漂白粉液浸消叶时显著降低了5龄家蚕的消化量和消化率；各处理组家蚕结茧率均显著低于对照，死笼率均显著高于对照，其中全程0.3%组对结茧率影响最大。以上说明，目前蚕种生产上采用的全程饲喂0.3%有效氯浓度漂白粉液浸消叶的消毒方式会影响家蚕的消化吸收，进而影响蚕体健康，对家蚕生理功能有一定影响。
　　2、饲喂不同有效氯浓度漂白粉液浸消叶对家蚕肠液消化酶和血液保护酶活性的影响实验结果表明，有效氯浓度为0.3%时家蚕肠液蛋白酶和淀粉酶活性受到抑制，尤其淀粉酶活性受到显著抑制，血液SOD、CAT、POD活性均显著上升；0.4%、0.5%、0.6%有效氯浓度下，血液POD、CAT活性均显著上升，家蚕肠液蛋白酶和淀粉酶活性显著下降，脂肪酶活性显著升高，推测是家蚕抵御有效氯胁迫的一种抗性反应。而全程饲喂0.3%有效氯浓度漂白粉液浸消叶后家蚕肠液蛋白酶和淀粉酶活性受到抑制，尤其淀粉酶活性受到显著抑制，血液CAT和POD活性显著上升。说明全程饲喂0.3%有效氯浓度漂白粉液浸消叶后影响了家蚕对桑叶蛋白和糖类的消化吸收，尤其对淀粉的消化受到显著抑制。此外，漂白粉的强氧化性对蚕体构成一种胁迫，使家蚕血液保护酶体系活性增强，相互协调，保护蚕体免受自由基损伤。
　　3、饲喂各有效氯浓度漂白粉液浸消叶均显著抑制了家蚕肠道细菌菌落数量，且随有效氯浓度升高抑制增强，全程0.3%组影响显著。饲喂漂白粉液浸消叶后，家蚕肠道内产蛋白酶和淀粉酶菌株数量减少，相对产酶能力减弱，产脂肪酶菌株只在0.6%组和全程0.3%组中筛选到，且0.6%组产脂肪酶菌株产酶能力明显高于全程0.3%组，推测脂肪酶可能与蚕体抵抗有效氯胁迫的抗性有关。饲喂浸消叶后家蚕肠道产消化酶细菌类群构成有一定变化，清水组和全程0.3%组产酶菌属有葡萄球菌属Staphylococcus sp.、Lelliottia sp.、布丘氏菌属Buttiauxella sp.；其他处理组的产酶菌属均只有葡萄球菌属Staphylococcus sp.，以上说明有效氯胁迫抑制了产蛋白酶和淀粉酶菌株的生长，产酶菌类群单一，这可能和肠道内消化酶活性的变化及家蚕的营养消化吸收相关，而全程0.3%组由于长期饲喂消毒桑叶导致蚕体已经形成对有效氯胁迫的应对方式。
　　4、生产上用0.3%有效氯浓度漂白粉液全程浸消桑叶的消毒方式致使家蚕肠液蛋白酶、淀粉酶活性下降，抑制了肠道产蛋白酶和淀粉酶菌株的数量和产酶能力，影响了家蚕对营养物质的消化吸收，蚕体血液抗氧化性保护酶POD、CAT活性在有效氯胁迫下升高，总体来看，家蚕的体质下降、结茧率下降、死笼率升高，影响了家蚕的生长发育和正常生理活动。因此，蚕种生产上应该改进漂白粉的使用方式，或筛选更有效的蚕用药物，以保证蚕种生产的安全进行。

目录

声明

第一章 文献综述

1.1 漂白粉的简介

1.2 漂白粉在蚕业生产上的应用

1.3 漂白粉液叶面消毒对桑叶和家蚕的影响

1.4 家蚕肠道微生态

第二章 引言

2.1 研究背景及意义

2.2 主要研究内容

2.3 技术路线

第三章 饲喂漂白粉液浸消叶对家蚕生长发育的影响

3.1材料与方法

3.2 结果与分析

3.3 讨论

第四章 饲喂漂白粉液浸消叶对蚕体酶活性的影响

4.1材料与方法

4.2 结果与分析

4.3 讨论

第五章 饲喂漂白粉液浸消叶对家蚕肠道产消化酶细菌的影响

5.1 材料与方法

5.2 实验方法

5.3 结果与分析

5.4 讨论

第六章 总结

附录

参考文献

致谢

硕士期间发表论文及参加课题