第1章 文献综述
1.1着丝粒的种类及研究概况
1.2着丝粒的结构组成及研究概况
1.2.1着丝粒的结构域
1.2.2着丝粒组成蛋白和DNA的研究
1.3着丝粒的功能及研究概况
1.4脊椎动物中着丝粒蛋白的研究概况
1.5分散型着丝粒生物的研究概况
1.5.1分散型着丝粒线虫的研究
1.5.2分散型着丝粒昆虫的研究
第2章 引言
2.1研究背景及目的意义
2.2研究内容
2.3研究技术路线
第3章 家蚕着丝粒蛋白的组成分析
3.1实验材料与仪器
3.1.1实验材料
3.1.2实验仪器与试剂
3.1.3试剂配制
3.2实验方法
3.2.2家蚕卵巢细胞系BmN4-SID I的培养
3.2.3转染与稳定细胞系的构建
3.2.4着丝粒蛋白的亚细胞定位
3.2.5干涉
3.2.6免疫荧光
3.2.7细胞冻存
3.3结果与分析
3.3.1家蚕着丝粒蛋白的亚细胞定位
3.3.2家蚕着丝粒蛋白缺少导致染色体发生紊乱
3.4讨论
第4章 家蚕着丝粒蛋白CenpN复合物鉴定
4.1实验材料与仪器
4.1.1实验材料
4.1.2实验仪器与试剂
4.1.3试剂配制
4.2实验方法
4.2.1 LR重组载体的构建
4.2.2免疫沉淀
4.2.3Western Blot检测
4.2.4银染
4.2.5 FASP法蛋白质酶解
4.2.6共定位实验
4.2.7 CO-IP实验
4.2.8 LC-MS/MS质谱联用检测
4.2.9数据库搜索
4.3结果与分析
4.3.1家蚕着丝粒蛋白复合物的分离
4.3.2家蚕着丝粒蛋白复合物的鉴定
4.3.3家蚕CenpN特异互作蛋白的功能分析
4.3.4家蚕CenpN特异互作蛋白的筛选
4.3.5家蚕CenpN互作蛋白的基因克隆
4.3.6家蚕CenpN与互作蛋白的共定位分析
4.3.7家蚕CenpN与互作蛋白的Co-IP分析
4.4讨论
第5章 家蚕CenpN互作蛋白的调控功能
5.1实验材料与仪器
5.1.1实验材料
5.1.2实验仪器与试剂
5.1.3溶液配制
5.2实验方法
5.2.1家蚕cDNA的获取
5.2.2合成双链
5.2.3双链RNA干涉
5.2.4干涉后基因的半定量检测
5.2.5干涉后Western Blot检测EGFP-CenpN的表达量
5.2.6泛素化检测
5.3结果与分析
5.3.1干涉双链的合成
5.3.2家蚕CenpN互作蛋白的基因干涉
5.3.3家蚕CenpN互作蛋白影响EGFP-CenpN表达
5.3.4 HSC70影响EGFP-CenpN表达及细胞定位
5.3.5 HSC70影响EGFP-CenpN表达
5.3.6过表达HSC70不影响EGFP-CenpN表达
5.3.7蛋白酶体抑制剂MG-132处理能够恢复EGFP-BmCenpN表达
5.3.8蛋白酶体抑制剂MG-132处理能够恢复FLAG-BmCenpN表达
5.4讨论
第6章 综合与结论
参考文献
在读期间发表论文及参研课题
致谢
附表
西南大学;
