降香中黄酮类化学成分研究和总黄酮的提取分离工艺考察

摘要

降香Lignum Dalbergiae Odoriferae，为豆科植物降香檀Dalbergia odorifera T.Chen的树干和根的干燥心材，降香檀是海南省特有树种，近年来两广及福建亦有引种。主要含有挥发油和黄酮类成分。本文对降香药材中的总黄酮成分进行了较为系统的研究。 方法:（1）以降香药材为原料提取并用溶剂萃取，对乙酸乙酯部位进行分离，波谱法测定化合物结构； （2）用自制的柚皮素为对照品建立适于测定降香总黄酮含量的新方法； （3）用正交设计的方法优化降香总黄酮提取工艺； （4）考察不同树脂对降香总黄酮纯化能力的差异，优选总黄酮的纯化方法； （5）建立HPLC方法测定不同来源降香药材中柚皮素和异甘草素含量。 结果： (1)乙酸乙酯部位通过反复柱层析，得到5个黄酮类化合物，经理化和波谱鉴定，分别为异甘草素（Ⅰ）、洪都拉斯黄檀素乙（Ⅱ）、柚皮素（Ⅲ）、山姜素（Ⅳ）和北美圣草素（Ⅴ），其中化合物Ⅳ和Ⅴ均为首次从该植物中分离得到。 (2)比较了四种已有文献报道的测定总黄酮含量的方法，发现都不适用于降香总黄酮的定量。本实验研究建立了适合降香总黄酮含量测定的新方法，即以自制的柚皮素为对照品, 甲醇钠显色，在紫外410nm下测量，该方法简单，重复性、稳定性和加样回收率均较好。 (3)对降香总黄酮的提取方法进行了正交设计实验，发现影响总黄酮提取量的主次因素为提取次数>提取温度>乙醇浓度>提取时间，其中提取次数和提取温度有显著性影响，确定最佳提取工艺为70％乙醇在90℃下提取3次，每次1.5h，优化了降香总黄酮的提取方法。 (4)选用9种不同型号的大孔吸附树脂对降香总黄酮进行分离纯化，通过静态吸附和解吸附的比较，认为HPD-100大孔吸附树脂对降香总黄酮的纯化富集效果较好，并考察了不同上样浓度、不同上柱流速对分离效果的影响及不同浓度乙醇洗脱液的动态解吸曲线，确定最佳的吸附及解吸工艺条件。最佳静态吸附时间和解吸附时间均为5h，最佳上样浓度为3.7mg/mL，最佳上样速度为2mL/min，醇浓度大于70％的乙醇溶液洗脱效果较好，洗脱的拖尾程度较小，吸附饱和时降香总黄酮的吸附量为24.983mg/g。 (5)以柚皮素和异甘草素为对照品，建立了HPLC含量测定方法，测定了不同来源的11批降香药材中的柚皮素和异甘草素的含量，对不同来源的降香药材的质量进行初步评价。认为从广西购入的降香中柚皮素与异甘草素含量均较高，且各不同来源的降香药材中的两种黄酮类化合物的含量差异较大。