卡维地洛对映体在经不同诱导剂诱导的人肝细胞中的代谢特征

摘要

手性药物在所有药物中占有相当大的比例，据统计，天然或半合成药物几乎都有手性，化学合成药物至少有40 ％为手性药物，然而其中90 ％是以外消旋体形式给药，从立体化学的角度看，实际上给予的并不是单一物质，而是两种或多种立体构象上不同的药物。这是因为手性是生物系统的基本特征，人体就是一种高度复杂的手性环境，构成机体的大分子物质如酶、载体、受体、血浆蛋白等都具有手性特征。因此手性药物作用于机体后，对映体与这些大分子物质结合，形成不同性质的非对映体复合物，呈现作用机制和结合力的差别，从而导致手性药物的体内立体选择性特征，即对映异构体在生物环境中表现出药物效应和药代动力学性质方面的特异性，包括药物效应的种类和强度，药物的吸收、分布、代谢、排泄等方面立体选择性的差异。因此，在临床治疗中，我们要结合考虑手性药物各对映体的药物动力学性质、效能、毒副反应，以及各种影响对映体选择性的因素，从而制定出合理的临床用药方案, 以达到最佳的疗效。 治疗个体化是近年来的重点和热点，阐明药物代谢的关键酶及其代谢途径，将减少临床按经验调整药物治疗方案和剂量的盲目性，真正实现临床用药的合理化和个体化。在机体内，物质代谢主要是在肝脏进行的，肝细胞色素P450氧化酶系(cytochromeP450，CYP450)是肝脏中重要的混合功能氧化酶系，对许多内源、外源性化合物在体内的生物转化有重要作用，在药理学和毒理学研究中有极其重要的意义。P450氧化酶系是由多个同工酶组成的基因超家族，其中参与内源性和外源性物质（包括药物、杀虫剂、环境污染物等）代谢的CYP450主要有CYP1A、2A6、2B6、2C、2D6、2E1和3A，分别占P450总量的13％、4％、0.2％、20％、1％～20％、7％和30％。 卡维地洛为一新型具有多种药理活性的抗高血压药物，它在临床上通常也以外消旋体给药，但据报道其对映异构体在药理学活性和药代动力学方面有较大差别，目前，国内尚没有关于卡维地洛对映异构体的代谢差异这方面的文献报道，国外早期有人做过CYP2D6和CYP3A4这两种酶的代谢产物和立体选择性差异。 因此本文选用肝细胞体外温孵法，以β萘黄酮(BNF)和异烟肼(INH)分别诱导人肝细胞作为CYP1A1和CYP2E1组成的酶源，并以未经诱导的人肝细胞作空白对照，研究卡维地洛R(+)和S (-)两种对映体体外代谢的酶动力学变化, 探讨在不同的酶源亚族中卡维地洛对映体代谢的差异和立体选择性，从而可深层次地认识一些药物相互作用的机制，并积极预测一些药物相互作用的发生，为临床合理用药提供依据。本研究包括二部分，分述如下。 第一部分 柱前衍生化HPLC法测定肝细胞培养液中卡维地洛对映体。 目的：建立人肝细胞培养液中卡维地洛消旋体的手性拆分方法，以研究卡维地洛体外代谢的立体选择性。 方法：选用GITC为柱前衍生化试剂，反相高效液相色谱法检测，色谱柱：Kromasil C18柱(4.6 mm ×150 mm，5 μm)；流动相：乙腈-0.02mol/L磷酸氢二钠（25:75），磷酸调PH至4.3；流速：1.0 ml/min；进样量：10μL；使用荧光检测器检测，激发波长：285 nm，发射波长：340 nm。 结果：完全拆分了卡维地洛对映体，分离度为3.2，定量限为0.068mg/L，平均日间和日内精密度都<10％ 结论：该方法分离效果好，方法学结果满意，可用于卡维地洛体外代谢的立体选择性的研究。 第二部分 卡维地洛对映体在不同诱导剂诱导的肝细胞中的代谢特征。 目的：通过肝细胞体外温孵法，以BNF和INH分别诱导人肝细胞作为由不同亚族CYP1A1和CYP2E1组成的酶源，并以未经诱导的人肝细胞作空白对照，研究卡维地洛两种对映体体外代谢的酶动力学变化，为临床合理用药提供依据。 方法： 1．分别以7-乙氧基试卤灵(7-ER)和氯唑沙宗为底物，测定CYP1A1和CYP2E1的活性变化，以确定BNF诱导CYP1A1和INF诱导CYP2E1的最佳浓度。 2．建立HPLC法测定卡维地洛含量的方法学。 3．测定在BNF和INF的诱导下，以及不经诱导时卡维地洛的酶动力学参数。 4．分别测定不同时间点时经BNF和INF的诱导以及不经诱导空白对照的卡维地洛的剩余浓度，建立底物浓度-反应时间曲线。 结果和结论： 空白对照组中肝细胞是对S(-)对映体有立体选择性的；同时结果显示CYP1A1对两对映体并无立体选择性，但较明显增加了对R(+)对映体的代谢；CYP2E1同样对S(-)对映体具有选择性。