诺帝对大鼠胶质瘤细胞系C6及其原位移植瘤功能性CXCR4的抑制作用

摘要

恶性胶质瘤是中枢神经系统常见的肿瘤之一，由于其位置的特殊性和高度侵袭性，目前常用的手术治疗、化疗及放疗等治疗手段常常难以达到理想效果，因此研究恶性胶质瘤的新方法十分必要。近些年对肿瘤血管生成机制的认识促进了抗肿瘤血管生成的研究和应用。我们前期研究证实，本所自行研制的化合物诺帝对人恶性胶质瘤细胞系SHG-44和CHG-5及其裸鼠移植瘤有明显的抑制生长作用，并发现诺帝具有抑制胶质瘤细胞血管生成因子VEGF表达的作用。为进一步研究证实诺帝的体内外抗肿瘤作用及其机制，本实验以大鼠胶质瘤细胞系C6及其原位移植瘤为材料，观察了诺帝对C6细胞趋化因子受体CXCR4功能性表达的影响及对C6原位移植瘤的生长和血管生成的影响。 采用免疫细胞化学技术检测C6细胞CXCR4和VEGF蛋白表达阳性；分别采用48孔趋化小室和激光共聚焦显微术检测了SDF-1α激活CXCR4诱导的C6细胞趋化运动和细胞[Ca2+]i变化及诺帝的作用。结果显示，在25～100ng/ml浓度范围内SDF-1α诱导的C6细胞趋化运动和细胞[Ca2+]i与空白对照相比均增强，且有显著性差异。而诺帝作用后抑制了C6细胞CXCR4、VEGF蛋白表达和SDF-1α激活CXCR4诱导的C6细胞趋化运动和[Ca2+]i升高。这些结果提示，诺帝对大鼠胶质瘤细胞功能性CXCR4表达具有明显抑制作用。 采用立体定向脑原位接种C6细胞的方法进行了Wistar大鼠胶质瘤移植实验，移植成瘤率100％。肿瘤在第1、2周生长较缓慢，到第3、4周时肿瘤迅速增大，大鼠开始出现体重下降、眶周出血、甚至偏瘫等明显的症状。荷瘤大鼠平均生存期为25.50±5.75天，生存周期稳定。移植瘤在脑实质内呈浸润性生长，瘤细胞异型性明显，有典型的栅栏状坏死，瘤内微血管丰富；免疫组织化学显示瘤细胞GFAP蛋白弱阳性，VEGF、CXCR4蛋白强阳性。上述瘤组织病理学特征与人脑胶质母细胞瘤相似，能满足胶质瘤实验治疗研究的要求。 利用C6脑胶质瘤模型进行体内治疗实验显示，按27mg/kg体重腹腔注射诺帝，病理学检查见治疗组肿瘤体积显著减小，瘤细胞排列较稀疏，瘤内微血管较对照组少。免疫组织化学显示VEGF和CXCR4蛋白表达降低。治疗过程中大鼠均未出现明显的脏器功能损害。这些结果提示诺帝对大鼠C6脑胶质瘤体内生长具有明显抑制作用，且这种作用可能与其抑制CXCR4和VEGF表达从而抑制移植瘤侵袭性生长和抗血管生成有关。 综上所述，大鼠胶质瘤细胞系C6有功能性CXCR4表达，诺帝能抑制这种功能性表达，并具有显著的体内抗胶质瘤作用。

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前言

第一部分大鼠胶质瘤细胞系C6功能性CXCR4表达和诺帝对其抑制作用

材料与方法

结 果

讨论

小 结

第二部分诺帝对Wistar大鼠脑原位移植瘤治疗作用及对CXCR4和VEGF表达的影响

材料与方法

结 果

讨论

小 结

全文结论

致 谢

图 版1

图 版2

图 版3

图 版4

图 版5

参考文献

文献综述血管内皮生长因子及其受体与肿瘤血管生成

硕士在读期间发表论文