大鼠无肝状态下异丙酚药代动力学及肝外UGT1A6基因表达变化的研究

摘要

目的：异丙酚是临床肝移植手术麻醉维持最为常用的静脉麻醉药，通常情况下主要由肝脏代谢后，经肾脏排出体外。目前研究发现肝移植无肝期异丙酚虽失去肝脏的主要代谢作用，但其代谢状况未受明显影响，这提示异丙酚存在肝外代谢并且无肝期的肝外代谢可能增强，但尚未证实。尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶1A6(UGT1A6)能使异丙酚葡醛酸化后经肾脏直接排出体外，肝脏中含量最多，机体的其它许多组织器官也有表达。UGT1A6的表达水平是通过即时的、组织特异性的和环境因素影响的调节方式进行的。肝移植无肝期机体内环境变化较大，机体中某些激素水平可能影响UGT1A6的肝外表达，从而影响异丙酚的肝外代谢。本实验以大鼠为对象，研究无肝状态下异丙酚药代动力学，并对无肝期前后肾脏、小肠、肺脏及脑等部位的UGT1A6基因表达变化进行研究，在此基础上检测无肝期前后GH、FT4的血清水平变化，初步探讨无肝期影响UGT1A6基因表达的可能机制，从而初步阐释无肝期异丙酚药代动力学的形成原因。 材料和方法：实验分为三部分：1.大鼠无肝期异丙酚药代动力学的变化。采用异丙酚标准品(1g/ml，纯度99.9％)，通过反相高效液相色谱(RP-HPLC)分析仪，制备大鼠异丙酚血药浓度标准曲线，建立微量血样检测异丙酚浓度的实验方法。SPF级雄性SD大鼠10只，乙醚麻醉后，行右侧颈深静脉切开，置入1.0号硅胶管。分别于肝门阻断前后，通过右颈深静脉两次注入异丙酚10mg/kg，于两次注射后的2、4、6、8、10、15、20、30、45、60min时相点处，通过右颈深静脉采血100μl，置入装有500μl去离子水的EP管中溶血，漩涡振荡，保存在4℃冰箱中待检。采用反相高效液相色谱分析法检测各时相点血药浓度变化，并应用3P-87药代动力学软件测算比较无肝期前后异丙酚的药代动力学参数。2.异丙酚代谢相关UGT1A6无肝期肝外表达的研究。SPF级雄性SD大鼠15只随机分为3组(5只/组)，A组为对照组(无肝期前)，B组阻断肝门30min(无肝期30min)，C组阻断肝门60min(无肝期60min)，乙醚麻醉后截取各组大鼠小肠、肾脏、肺脏、脑组织，采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术，检测各组UGT1A6mRNA的表达。3.无肝期前后大鼠体内GH、FT4水平的变化。SPF级雄性SD大鼠20只，乙醚麻醉后，行右侧颈深静脉切开，置入1.0号硅胶管。于麻醉后(无肝期前)、肝门阻断30min(无肝期30min)、60min(无肝期60min)等时间点，从右颈深静脉采血1ml，采用放射免疫法检测三个时相点GH、FT4血清浓度的变化。 结果：1.在选定的色谱条件下，测得异丙酚色谱图被测物与内标物两者峰形良好，分离完全，无杂质峰干扰，异丙酚及内标的保留时间分别为8.02min和4.77min；异丙酚标准曲线方程为C=0.183X+5.04×10-3，R2=0.9999，P＜0.05，大鼠体内异丙酚最低检测浓度为0.25μg/ml；检测方法精密度优良；2.无肝期前后，异丙酚单次剂量注射血药浓度变化无明显差异，药代动力学各参数中T1/2α、T1/2β、Vd无明显改变(P＞0.05)，AUC明显增大(P＜0.05)，CL减少非常显著(P＜0.01)。3.肝外器官(小肠、肾脏、肺脏和脑)UGT1A6的基因表达，在无肝期30min和60min均显著高于无肝期前(P＜0.01)，无肝期30min与60min相比较无显著差异(P＞0.05)。4.GH血清水平无肝期30min和60min均显著高于无肝期前(P＜0.01)，无肝期30min与60min相比较无显著差异(P＞0.05)。5.FT4血清水平无肝期30min和60min均显著高于无肝期前(P＜0.01)，无肝期30min与60min相比较有显著差异(P＜0.05) 结论： 1.本实验建立的微量血样检测异丙酚血药浓度的方法特异性强、日内日间变异小、线性范围广、简便准确，可作为检测异丙酚血药浓度的常规方法。 2.无肝期异丙酚药代动力学特点为T1/2α、T1/2β、Vd无明显改变，AUC明显增大，CL减少非常显著。 3.无肝期异丙酚的肝外代谢显示增强。 4.异丙酚代谢相关UGT1A6在无肝期基因表达增强，此可能为无肝期异丙酚肝外代谢增强的分子机制之一，同时也可能是异丙酚无肝期药代动力学特点形成的原因之一。 5.无肝期大鼠GH、FT4血清水平均显著升高，可能直接或间接促进肝外UGT1A6基因表达。

目录

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英文缩写词表

摘要

前言

第一部分大鼠无肝状态下异丙酚药代动力学的研究

第二部分无肝状态下大鼠肝外器官异丙酚代谢相关UGT1A6基因表达的研究

第三部分无肝状态下大鼠体内GH与FT4水平变化的研究

全文讨论

结论

致谢

附图

参考文献

文献综述异丙酚的代谢酶及其肝外代谢

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