TLR4和TLR2激动剂协同诱导SR-A受体表达及其在内毒素耐受中的作用

摘要

小剂量的内毒素预处理后的单核细胞和巨噬细胞对LPS再次刺激的反应性明显降低，表现为炎症因子的分泌减少；而且能提高小鼠在致死剂量内毒素再次刺激后的存活率，即内毒素耐受现象。自从证实TLR(Toll-likereceptor)4是LPS的信号受体以来，内毒素耐受的研究主要集中于信号受体和TLR4胞内信号分子的变化。基因敲除试验证实SR-A(macrophagescavengerreceptorA)能通过调理素非依赖的方式吞噬细菌，从而提高小鼠对病原体攻击的抵抗能力，然而SR-A是否同样参与内毒素目前还不清楚。我们发现LPS能以剂量和时间依赖的方式诱导RAW264.7表达SR-A，这与RAW264.7对LPS的再次刺激后分泌的炎症因子(TNF-α和IL-6)减少之间有着很好的相关性。过量表达或瞬时转染SR-A能抑制LPS刺激RAW264.7分泌炎症因子或活化NF-κB，说明LPS诱导上调的SR-A参与了内毒素耐受。另外，LPS能增强RAW264.7对FITC-LPS的结合和吞噬，但是能被清道夫受体SR配体Fucoidan和抗SR-A抗体2F8特异地抑制，提示RAW264.7结合和吞噬FITC-LPS的SR-A受体特异性。过量表达或瞬时转染SR-A△1-49也同样能抑制LPS刺激RAW264.7分泌炎症因子或活化NF-κB，提示SR-A介导的RAW264.7对FITC-LPS的结合也能一定程度上抑制炎症反应。虽然，TLR4是LPS的信号受体，但是TLR4/MD-2抗体抑制TLR4信号后并不能抑制LPS诱导RAW264.7表达SR-A。然而，p38特异性抑制剂SB203580却能完全抑制LPS诱导RAW264.7表达SR-A。因此，p38，而不是TLR4，依赖的SR-A上调可能通过结合或吞噬LPS参与RAW264.7细胞内毒素耐受的形成。 已知sLPS(来源于Sigma的EscherichiacoliO111：B4LPS)能诱导RAW264.7表达SR-A，但是许多商品化LPS，包括我们所用的sLPS，通常含有TLR4和TLR2两种激动剂，有关它们在诱导RAW264.7表达SR-A中的相对作用目前还不清楚。荧光素酶试验证实我们所用的sLPS确实具有活化TLR4和TLR2两种活性，但是重新纯化去除TLR2激动剂或用多粘霉素(PmB)特异中和TLR4激动剂后的sLPS均只能微弱地诱导RAW264.7表达SR-A，但是等量的uLPS(re-extractedsLPS)和Pam3CSK4混合物却能协同地诱导RAW264.7表达SR-A，而对TLR2和TLR4受体的表达没有协同作用。虽然，TLR2和TLR4激动剂能协同刺激RAW264.7分泌炎症因子，但是细胞因子TNF-α、IL-6、IL-10或IL-12单独与RAW264.7孵育均不能诱导SR-A的表达，TNF-α甚至能抑制uLPS和Pam3CSK4混合物诱导SR-A的表达。15μMNF-κB抑制剂PDTC只能微弱抑制uLPS和Pam3CSK4混合物诱导SR-A的表达，但是uLPS和Pam3CSK4混合物能促进p38的磷酸化，而且10μM以上浓度的p38特异性抑制剂SB203580能完全抑制LPS诱导RAW264.7表达SR-A。另外，uLPS和Pam3CSK4混合物还能促进RAW264.7结合和吞噬FITC-LPS，但是能被抗SR-A抗体2F8特异地抑制，提示RAW264.7结合和吞噬FITC-LPS的SR-A受体特异性。因此，我们的结果证明了TLR4激动剂和TLR2激动剂通过促进p38的磷酸化协同诱导RAW264.7表达SR-A，促进RAW264.7结合和吞噬LPS，从而负调炎症反应；同时我们也报导了TLR4和TLR2信号之间的一种新的交互关系。 总之，我们的结果证实TLR2和TLR4激动剂能协同诱导SR-A的上调，上调的SR-A可增强RAW264.7对LPS的吞噬，从而参与RAW264.7内毒素耐受的形成和下调过强的炎症反应。

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英文缩写一览表

第一部分: p38，而不是TLR4，依赖的SR-A上调参与RAW264.7的内毒素耐受

第二部分 TLR2和TLR4激动剂通过增强p38磷酸化协同诱导RAW264.7表达SR-A

全文结论

致谢

文献综述一 Toll-like receptor 激动剂耐受分子机制的研究

文献综述二 TLR信号通路及其对适应性免疫的调节

攻读博士期间已发表和拟发表的文章